大环内酯类抗生素对绿藻属浮游植物生长特性的影响研究.docVIP

大环内酯类抗生素对绿藻属浮游植物生长特性的影响研究 林榕梅，庄建梅，陈森，邱育苗 指导老师：刘爱芬 （漳州师范学院化学与环境科学系，福建漳州 363000） 中文摘要：利用室内培养实验,研究不同抗生素浓度处理下斜生栅藻叶绿素含量、可溶性蛋白含量的变化规律。结果表明，它们的适宜抗生素浓度为0.08（mg·L - 1 )有利于藻类生长及叶绿素合成,抗生素浓度大于0.08（mg·L - 1 )小于 0.18（mg·L - 1 )时，促进作用减弱。抗生素浓度大于0.18（mg·L - 1 )时，抑制作用加强。 关键词：可溶性蛋白 叶绿素 红霉素 斜生栅藻 抗生素大量存在于在畜禽粪便和施用粪肥的土壤中。王冉等（2009）的研究结果表明, 肉鸡经饲料服用金霉素后有较高比例金霉素以原形形式随排泄物排出,且不易被降解, 排泄物中高含量金霉素残留存在着较大的环境风险。本实验选用红霉素肠溶片白色或类白色结晶性粉末，无臭，味苦，微有吸湿性。熔点130～140(分解)。旋光度-70°～-78°(c=2，乙醇)。易溶于乙醇、氯仿、丙酮和乙醚，微溶于水，成盐后溶解度增加。在干燥空气中稳定，遇酸不稳定。Scenedesmusobliquus）是一种常见的浮游藻类，容易培养且对毒物反应敏感，外源污染物对其光合作用、生长速度、酶活性等均有影响（黄国兰等，1994；胡芹芹等，2008）。目前有关抗生素对斜生栅藻生理生化特性的影响尚未见报道.本研究初步探讨了抗生素对斜生栅藻光合色素含量等生理生化指标的影响，为进一步评价抗生素对水生生物的毒性效应及其环境风险积累科学依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 材料与试剂：供试藻种为斜生栅藻（Scenedesmus obliquus）引自中国科学院武汉水生生物研究所;红霉素,95%乙醇等。 1.1.2 仪器与设备：722型分光光度计（海大尼科仪器有限公司）、800离心机（江苏省金坛市鸿科仪器厂）培养箱等 1.2 方法 1.2. 1 培养 斜生栅藻在无菌条件下转移至HB-4人工培养液中,于光照培养箱中驯化培养1周,至对数生长期进一步扩大培养,培养条件为:温度28℃，光暗比12h:12h，光强60μE·m-2·s-1，静置培养，每天定时人工摇动3 次，在藻种液起始藻密度均为104ind/L,根据预试验加入红霉素溶液，使其终浓度分别为0、0.08、0.18、0.28、0.38、0.48mg L-1，用培养液定容至200ml。每个处理组设置2个平行.静置培养，四天后测定。 1.2.2测定 1）叶绿素含量的测定[1] 藻细胞的收集：培养96h后每组取25mL藻液，5000r·min-1 冷冻离心10min 收集藻细胞，用蒸馏水洗涤2次，去上清夜。 往离心管中加入少量体积分数为95%乙醇，把藻细胞倒出来，研磨至组织变白，研磨15min。再把此研磨液倒回离心管，用95%乙醇洗净研钵，并用95%乙醇定容至5ml，之后在4000 r·min-1 离心15 min。 测定吸光度：分别取适量上述上清液，用分光光度计于665 nm，649 nm，652 nm 处以浓度95%乙醇作为参比样品液测定吸光度。 计算结果：叶绿素含量由下式计算： Ca+b（mg/L）=1000A652/34.5 34.5为叶绿素a和b在波长652nm处的吸光系数 2）藻液可溶性蛋白含量的测定[2] 考马斯亮蓝试剂(G-250)的配制:100 mg溶于50 mL 95%乙醇中,加入100 mL,用蒸馏水稀释至1000 mL,滤纸过滤。最终试剂中含0. 01% (W /V)考马斯亮蓝G-250,4. 7% (W /V)乙醇。 标准蛋白质溶液:称取10 mg牛血清白蛋白溶于0. 15 mol/L NaCl并定容至100 mL制成100μg/mL的原液。 标准曲线绘制：取7支试管,按表1操作。摇匀，显色5分钟，在595nm处测定吸光值。绘制标准曲线:以A595 nm为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标,在坐标纸上绘制标准曲线。 表1 小牛血清蛋白标准曲线的绘制 0 1 2 3 4 5 6 0.1mg/mL标准蛋白溶液 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.15mol/L NaCl溶液 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 考马斯亮蓝溶液/mL 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 样品蛋白溶液的制备：取已洗净烘干并已称重的11个离心管。各取藻液50ml，分别放入离心管( 50 mL )中,在冷冻离心机4 000 r /min 转速下离心15min,倒出离心清液,将离心管倒置滴干,分别称重并记录质量。往离心管中加入少量0. 05 mol/L pH 7. 8的磷酸缓冲液,倒出，研磨，再倒回离心管中，定