8氯腺苷的抗肿瘤作用机理研讨.pdfVIP

2．8．5 KGM酶解产物的初步分析 解液，在硅胶G薄层上点样后，于层析缸内用展层剂展层4h，烘干后用显色剂均匀喷雾，在120℃下现色 5min。结果如图12，纯化过的KGM的酶解液为一系列分子量分布范围较广的低聚糖，魔芋精粉酶解液除 含一系列分子量分布范围较广的低聚糖外，还含有单糖。 3．结论 实验结果表明，解淀粉芽孢杆菌R。。以魔芋精粉2％(m／m)为碳源，魔芋飞粉1％(m／m)为氮源摇瓶培养 ℃，最适作用pH为6．5，底物专一性强(以魔芋胶为底物测定的酶活力是以瓜尔胶为底物的2～3倍)。 魔芋葡甘露聚糖经酶降解后为一系列低聚糖。此酶的作用机理还有待进一步研究。 R-o的生长速度快，抗杂菌能力强，发酵条件易控制，适合工业化应用。 参考文献(略) 8一氯腺苷的抗肿瘤作用机理研究 徐波，张宙航。吴军，崔景荣· (北京大学医学部天然药物及仿生药物国家重点实验室，北京100083) cAMP是细胞内的第二信使，它的类似物可以模拟cAMP的作用抑制肿瘤细胞的增殖，诱导分化和引 合成，抑制癌基因表达，影响细胞周期移行，诱导凋亡及调节细胞信号传导通路等的作用…。8一氯腺苷 机理做了一些研究。有文献报道，8一氯腺苷能抑制多种肿瘤细胞的增殖心1；诱导多种肿瘤细胞产生凋亡 表达；引起细胞内第二信使cAMP含量的升高和DAG(二脂酰甘油)含量的降低：还可使肿瘤细胞中蛋白 激酶A(PKA)I型调节亚型转录水平下降151。因此，8一氯腺苷的抗肿瘤作用机制有可能是多靶位的。 众所周知，酪氨酸蛋白激酶(TPK)介导的信号传导通路是外界信号进入细胞的途径之一。酪氨酸蛋白 激酶特异地催化蛋白质酪氨酸残基磷酸化，与丝氨酸蛋白激酶不同，它由生长因子或生长因子受体复合 但在具有TPK活性的癌基因病毒转化的细胞中，酪氨酸的磷酸化却增加了十倍。许多生长因子(例如： 增殖。但在正常细胞中它们的产生、激活都受到严格的控制，因此可限制细胞增殖。一旦失控，可导致 细胞恶变。在肿瘤细胞中TPK的活性异常增高，因此，可以把TPK作为一个靶点来研究抗癌药物对信号 ·523· 传导系统的影响】。 EGFR是细胞的一种具有酪氨酸蛋白激酶活性的膜蛋白，而且在部分肿瘤细胞中高表达m1，EGFR又与 Ras蛋白密切相关。在以TPK介导的信号传递过程中，Ras起着分子开关的作用，它把酪氨酸磷酸化瀑布 性对于细胞的增殖和转化是必需的，并通过ERK调节各种核内转录因子、胞浆蛋白以及细胞周期移行伸3。 酸蛋白激酶有关的信号传导通路在8一氯腺苷的抗肿瘤作用机制中的作用。 1．材料与方法 1．1细胞及培养条件 1．2药品及试剂 (postassium 体，为Santa 1．3酪氨酸蛋白激酶活性的测定 按文献所述¨们，采用ELISA的方法。 1．4Ras基因表达的测定 参照文献方法测定㈣。 1．5Western Blot方法检测细胞内相关蛋白的表达 印迹至硝酸纤维素膜上。于室温下用15％脱脂奶粉封闭1小时，进行核心蛋白一抗体结合，40C条件下轻 光片曝光后显示目的蛋白，采用凝胶分析系统分析并处理。 2．结果与讨论 2．18一氯腺苷对细胞内酪氨酸蛋白激酶活性的影响酪氨酸蛋白激酶(TPK)介导的信号传导通路是外 界信号进入细胞的途径之一，它有别于其他信号传导通路，可由生长因子或生长因子受体复合物直接激 活性m1。在呈恶性生长的肿瘤细胞中，人们检测到异常增高的酪氨酸蛋白激酶活性。本文实验证实8一氯 且其降低的程度与8一氯腺苷的浓度及作用时间呈一定的正相关性(图1)。 ·524· 八 0．3 量 0．2 累 寸 《 O．1 0 O 2 4 8-氯腺苷mM)