分子生物学导论-分子生物学研究方法(2).pptVIP

第四节 DNA重组技术 第五节 基因分离技术 第六节 分子杂交技术 在大多数核酸杂交反应中，经过凝胶电泳分离的DNA或RNA分子，都必须通过毛细管或电导作用被转移到滤膜上，而且是按其在凝胶中的位置原封不动地“吸印”上去的，因此，核酸杂交也被称为“DNA印迹杂交”。 分子杂交是目前分子生物学最广泛应用的技术之一。利用此技术，可以求出特定基因的频率、基因组织的特点、基因结构和定位、基因表达等。 电泳凝胶核酸印迹法 斑点和狭线印迹法 菌落和噬菌斑印迹法 E.M. Southern于1975年首先设计出来的。 材料： 尼龙滤膜 硝酸纤维素滤膜 二乙氨基乙基纤维素滤膜（DEAE） 步骤： 第一：将分离的核酸样品转移到固体支持物滤膜上－核酸印迹转移 第二，是将具有核酸印迹的滤膜与带有放射性或其它标记的DNA探针进行杂交 一、Southern印迹杂交(DNA) Southern Blotting的过程 1. 碱变性的琼脂糖凝胶电泳分离的DNA 2. 通过电泳液的移动转移胶中的DNA 3. 固定胶中的DNA到膜上 4. 预杂交和杂交（放射性和荧光检测） 5. 结果检测 M 1 2 10×SSC转移缓冲液 Whatman滤纸 凝胶 Whatman滤纸 纸巾 玻璃板 重物 支持物 500g 1 2 与探针同源杂交的基因DNA片段 基因组DNA DNA酶切片段