MT-GAG对汞引起红细胞溶血的抑制作用.docVIP

精品论文 参考文献 MT-GAG对汞引起红细胞溶血的抑制作用 1，内蒙古医科大学 内蒙古呼和浩特 010059；2，广东医学院生理教研室 524023 3，湛江市霞山骨伤科医院 524030；4，湛江市索奇生物技术有限公司 广东湛江 524000 摘要：目的：通过检测MT-GAG对HgCl2引起的红细胞溶血率减少的百分数，考察其稳定性和活性。方法：用新鲜兔全血制备红细胞悬液，在使红细胞全部溶血的Hg离子环境中加入不同受热时间的MT、MT-GAG溶液，测定417nm下的吸光值。结果：MT-GAG在105℃受热30分钟时溶血率减少的百分数HMTge;77%。结论：MT- GAG比MT可耐受更长的受热时间，对HgCl2引起的红细胞溶血具有抑制作用。 关键词：MT；MT-GAG；红细胞溶血；抑制作用；汞 金属硫蛋白（MT）是一种广存于生物体内富含半胱氨酸的金属结合蛋白。自从Margoshes（1）首次从马肾中分离出金属硫蛋白后，对其在Cd、Hg、Pb等重金属解毒的重要性方面已有大量的研究报道（2-7）。在机体组织受到损伤、炎症、射线辐照和重金属含量增大时，体内的金属硫蛋白含量剧增，并参与机体应激时的细胞适应反应，是机体损伤的第一防御蛋白（8）。 糖胺聚糖（GAG）是由含已糖醛酸和己糖胺成分的重复二糖单元连接成的直链杂多糖。专利产品MT-GAG是糖胺聚糖与金属硫蛋白组成的糖蛋白，分子中的寡糖可通过改变蛋白质的疏水性、电荷、溶解度、粘度、质量和大小修饰蛋白质的理化性质，可起着稳定糖蛋白，使其能抵抗变性的作用。为验证MT-GAG的稳定性和活性，我们使用由广东湛江市索奇生物技术有限公司课题组提供的MT、GAG和MT-GAG进行实验，以观察105℃不同受热时间下三种物质对HgCl2引起的红细胞溶血的抑制作用。 材料、方法与结果： 1.材料： MT、GAG和MT-GAG（均由湛江市索奇生物技术有限公司课题组提供）；氯化汞由贵州铜仁汞矿试剂厂生产；离心机（XY180-2T）；分光光度计（53WB UV/VIS）；三公斤以上的家兔由广东医学院动物中心提供； 2.方法与结果： 2.1红细胞悬液的制备： 取新鲜兔肝素抗凝血2ml，2500 r/min离心5 min，吸掉血浆与白细胞，红细胞用10倍PBS清洗后，2500r/min离心5 min，弃掉上清液，重复清洗三次后，配成1times;108 红细胞/ml悬液，备用。 2.2氯化汞浓度与溶血率的关系： 测定Hg2+浓度0～2times;10-4mol/L对兔血红细胞溶血的影响。取以上配制的红细胞悬液，吸取0.1ml，分别加入7.90ml不同浓度的HgCl2溶液（Hg2+浓度0～2times;10-4mol/L），轻摇后于37℃温育30min，然后在3000r/min离心5 min，取上清液测定417nm下的吸光值，计算溶血率Hp=（A-A0）/（Aprop;-A0），式中A0为不加HgCl2时上清液的吸光值，A为加入一定HgCl2后对应的上清液吸光值，Aprop;为HgCl2浓度大到红细胞完全溶血时对应的吸光值。从下表中可见随Hg2+浓度增加，Hp%增大，当Hg2+浓度＞37.5times;10-6mol/L时，Hp%有突跃，大于56.3times;10-6mol/L时，红细胞全部溶血，试验重复5次取平均值。见表1。 2.3 MT对HgCl2引起的红细胞溶血的抑制作用： 取用NaCI调等渗后的1times;10-6mol/L MT一定量，加入到2times;10-5mol/L HgCl21.0ml溶液中，使MT与HgCl2浓度比达到一定值，用PBS调体积到7.9ml，混合均匀后，放置5min再加0.1ml红细胞悬液，使总体积为8 ml，轻摇后于37℃温育30min，然后在3000r/min离心5 min，取上清液测定417nm下的吸光值，每个浓度比分别以相应CMT浓度中不加HgCl2为空白对照管，试验重复5次取平均值。Aprop;=0.620plusmn;0.015是不加MT红细胞完全溶血时吸光值，计算溶血率减少的百分数HMT=1－A/ Aprop;，以下数据可以看出随体系中MT含量的增高，红细胞溶血率减少的百分数 HMT就增大。见表2。 2.4 MT、GAG与MT-GAG在不同受热时间对HgCl2引起的红细胞溶血的抑制作用： 取2.25times;10-4mol/L HgCl2 溶液2ml，分别加入经105℃不同受热时间处理后1times;10-6mol/L 的MT、GAG、MT-GAG 0.4ml，用NaCI调等渗，使MT、GAG、MT-GAG与HgCl2摩尔浓度比达