γ 干扰素释放试验快速诊断肺外结核的探讨.docVIP

精品论文 参考文献 γ 干扰素释放试验快速诊断肺外结核的探讨 陈永芳1 , 2 李晟磊1 李瑞2 陈裕2 于永敏2 　　（ 1 郑州大学基础医学院病理教研室 河南郑州 450000） 　　（ 2 郑州市第六人民医院呼吸五科 河南郑州 450015） 　　【摘要】目的 探讨gamma; 干扰素释放试验（T-SPOT．TB）对肺外结核快速诊断的应用价值 方法 采用结核杆菌感染T-SPOT．TB 试剂盒对外周血标本检测， 根据斑点数推测体内是否存在对结核杆菌反应的效应T 细胞，对结核杆菌感染进行辅助诊断。结果 结核分枝杆菌特异性T 细胞阳性率，肺外结核组与两对照组比较，差异均有显著统计学意义(Plt;0．05)，T-SPOT．TB 检测结核特异T 细胞方法的敏感性为68.9％，特异性84％。结论 T-SPOT．TB 技术对隐性结核有诊断价值，有助于肺外结核的诊断和治疗。我市结核分枝杆菌的感染情况较为严重，在结核病防治工作中应给予充分重视。 　　【关键词】结核分支杆菌 T-SPOT．TB 肺外结核 　　【中图分类号】R521 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）38-0068-02 　　据“全国第五次结核病流行病学抽样调查报告”, 中国是全球22 个高负担国家之一，结核病人数居全球第2 位。属于高疫情地区[1]。临床上常常遇到临床表现不典型的肺结核病和肺外结核病，目前用于结核病的诊断方法有限，也缺乏快速敏感的实验室技术，为结核病的早期诊断与治疗带来困难。酶联免疫斑点(Enzyme linked immu—nospot assay，ELISPOT) 技术是一种新型的免疫酶技术，从单细胞水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞[2]。由ELISPOT 发展而来的结核感染T 细胞斑点试验(T-SPOT.TB) 技术用于检测结核感染后特异性T 细胞分泌的干扰素(IFN-gamma;)，并据此结果判断是否感染结核具有高度的敏感性和特异性, 目前已广泛应用于临床诊断结核分支杆菌感染的相关疾病。本文就我院就诊的肺外结核病患者用T - S POT．TB 方法检测，探讨其对肺外结核快速诊断的应用价值。 　　1 材料和方法 　　1.1 对象收集 　　选自2012 年6 月至2013 年2 月于郑州市第六人民医院就诊的30 名健康体检者，年龄18 ～ 50 岁。30 例非结核疾病患者，其中，6 例肺癌，10 例肺气肿，10 例糖尿病，4 例关节脓肿。以上病例均结合相关辅助检查，临床确诊排除结核感染。肺外结核患者45 例，年龄18 ～ 72 岁， 所有患者均经病理检测或穿刺物查到抗酸杆菌确诊。其中淋巴结结核10 例，骨结核5 例，结核性腹膜炎10 例，结核性胸膜炎17 例，肾结核3 例。所有检测均于早晨取血10 m1。 　　1.2 试剂和仪器 　　CO2 细胞培养箱，结核杆菌感染T-SPOT．TB 试剂盒。 　　1.3 外周血单个核细胞的分离和计数 　　采集4 ml 外周血标本于8 ml 柠檬酸钠抗凝的真空采血管Vacutainer CPT(BD) 内，血标本注入管子后，立即轻轻颠倒5 次，充分混匀血和抗凝剂。按试剂盒操作，制备细胞沉淀悬液。在1．5 m l， 离心管中加入10ul 已制备样品细胞悬液和40ul 的0．4％台酚兰(trypan b l u e )，制备l：5 细胞稀释液。取10u l 台酚兰／细胞混合悬液加入血细胞计数板并进行活细胞计数计算每毫升细胞数量。手工使用血细胞计数板，计数4times;4 大格含0.1u l 样品。每毫升细胞数量= 细胞计数times; 稀释倍数times;104 计算细胞稀释需要的体积并加入相应的A IM—V 无血清培养液制备成终浓度为250 000 ／ 100ul 的稀释细胞工作液。 　　1.4 检测 　　分别加人50u l 培养基，阳性质控物，结核分枝杆菌特异抗原A 和B 于相对应阴性对照和阳性对照孔，A 和B 检测孔。对于每个标本加入100u l 浓度为250000 ／ 100u l 的稀释细胞工作液。37℃ 5％ C02 孵育16 ～ 20 hrs。PBS 洗板4 次。加入50ul BCIP ／ NBT 底物溶液至所有孔中。室温孵育7 min。用去离子水充分洗涤孔的内部终止反应，在37℃ 2-3h 或室温过夜干燥培养板。使用德国AID read 酶联斑点计数仪计数每个孔中的有色斑点。 　　1.5 结果判断 　　阴性对照孔斑点数为0-5，阳性样本应为：( 抗原A 或抗原B 斑点数) 一阴性对照孔斑点数ge; 6 点；或阴性对照孔斑点数ge; 6 点，阳性样本应为：( 抗原A 或抗原B 斑点数) ge; 2times;( 阴性对照孔斑点数)。如果阳性对照孔结果良好，但抗原A 或抗原B 均