熟地黄水提物含药血清对huvecs1细胞增殖及epo-中国中药杂志.pdfVIP

第３３卷第１３期 　　　 中国 中药杂 志 Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ　１３ ２００８年７月 　　　　　　　　　ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ　　　　　　　 Ｊｕｌｙ，２００８ 熟地黄水提物含药血清对 ＨＵＶＥＣｓ１细胞 增殖及 ＥＰＯ表达的影响 １ ２ １  ３ ４ 祝慧凤 ，万　东 ，陈　怡 ，徐晓玉 ，陈　立 ，何正光 （１．西南大学 中医药学院，重庆４００７１６； ２．重庆医科大学 附属第一医院，重庆４０００１６； ３．西南大学校医院，重庆４００７１６；４．重庆师范大学校医院，重庆４０００４７） ［摘要］　目的：探讨熟地黄水提物含药血清对人脐静脉内皮细胞１（ＨＵＶＥＣｓ１）增殖的影响及其机制。方法： －１ 熟地黄水提物３，６，１０ｇ·ｋｇ 分别给ＳＤ大鼠灌胃１周，取血制备含药血清，加入血管内皮细胞培养液。采用ＭＴＴ 法观察血清对ＨＵＶＥＣｓ１增殖的影响，免疫细胞化学染色和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测血清对ＨＵＶＥＣｓ１表达红细胞生成素 －１ （ＥＰＯ）的影响。结果：与相同浓度的ＮＳ血清组比较，３，６ｇ·ｋｇ 地黄水提液含药血清组ＨＵＶＥＣ１吸光度显著升 －１ 高（Ｐ＜００５）。免疫组化结果显示，３，６ｇ·ｋｇ 熟地黄水提物５％含药血清组与相同浓度ＮＳ血清组比较，３，６，１０ｇ －１ ·ｋｇ 熟地黄水提物１０％，２０％含药血清组与相同浓度ＮＳ血清组比较，ＥＰＯ免疫反应阳性细胞平均吸光度均显著 －１ 增加（Ｐ＜００５）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析显示：与ＮＳ血清组比较，６ｇ·ｋｇ 熟地黄水提物相同浓度含药血清各组ＥＰＯ 相对条带吸光度值（ＩＯＤ）均显著增高（Ｐ＜００５）。结论：中药熟地黄水提物含药血清可上调血管内皮细胞ＥＰＯ表 达，对血管内皮细胞有显著的促增殖作用。 ［关键词］　熟地黄水提物；内皮细胞；滋阴补血，益精填髓；红细胞生成素 ［中图分类号］Ｒ２８５．５　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１５３０２（２００８）１３１５７９０４ 　　高脂、高糖、氧自由基对血管内皮的损伤是启动 ２８０ｇ，由重庆医科大学实验动物中心提供（合格证 心脑血管疾病的关键环节［１］。具有滋阴补血，益精 号２００２Ａ０４０），试验前适应环境饲养１周。 填髓功效的熟地黄，有改善血虚大鼠外周血像、改善 １．２　药物　怀熟地黄饮片购自成都中医药大学惠 痴呆模型鼠记忆、降糖、降脂、抗氧化等药理作 康药业有限公司，批号０３０８１８，经重庆医科大学中 ［２，３］ 用 。熟地黄是治疗心脑血管疾病的常用药物， 医药学院王刚副教授鉴定。 推测其对脑血管疾病可能具有保护作用。红细胞生 １．３　试剂　胰蛋白酶（ｔｒｙｐｓｉｎ），二甲基亚砜（ＤＭ 成素（ＥＰＯ）是一种既能促进骨髓造血，又能促进内 ＳＯ）、四氮唑蓝（ＭＴＴ）（美国 Ｓｉｇｍａ公司）；ＲＰＭＩ 皮细胞增殖、迁移和血管新生，并具有神经保护多效 １６４０培养基（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司）；新生小牛血清（杭州四 ［４，５］ 性的细胞因子 ，在心脑血管疾病修复中举足轻 季青公司）；兔多抗 ＥＰＯ，ＥＰＯＲ抗体（ＳａｎｔａＣｒｕｚ公 重。本研究采用血清药理学方法，观察熟地黄对人 司）；ＳＡＢＣ试剂盒、ＤＡＢ显色试剂盒（武汉博士德生 脐静脉内皮细胞１（ＨＵＶＥＣｓ１）增殖以及对ＥＰＯ表 物技术有限公