应用二次回归正交旋转组合设计优化L异亮氨酸发酵培养基研究.pdfVIP

应用二次回归正交旋转组合设计优化 L一异亮氨酸发酵培养基 王 菲 张克旭 陈 宁 (天津科技大学食品科学与生物工程学院天津300222) 摘要本研究在摇瓶条件下，采用X-：R回归正交旋转组合设计，优化出I广异亮氨酸发酵 培养基各组分的配比。利用计算机对试验结果进行回归和模拟，建立了培养基各组分对产 量影响的回归方程，获得了最佳发酵培养基配比。在此条件下，L异亮氨酸产率提高了 15％。 关键词L异亮氨酸，培养基，二次回归正交旋转组合设计，MATLAB L异亮氨酸是人体八种必需氨基酸之一，又是三种支链氨基酸之一，因其特 殊的结构和功能，在人类生命代谢中具有特别重要的地位。L广异亮氨酸可用于 配置一般营养型复合氨基酸输液、要素膳、以及治疗型特种氨基酸输液如肝安、 肾安氨基酸输液等，其用量逐年增长…I。由于L异亮氨酸生物合成途径的特殊 性，发酵条件尤其是培养基配比对其有较大的影响。本文利用二次回归正交旋 对产酸的影响并获得了最佳发酵培养基组成。 1材料与方法 1．1供试菌株：黄色短杆菌Brevibacterium AEC。)，天津科技大学代谢控制发酵实验室保藏菌种。 1．2培养基(g／L) 1．2．1活化斜面培养基：葡萄糖5，酵母膏10，蛋白胨10，牛肉膏10，氯化钠 20rain 2．5，琼脂20，pH7．0—7．2；1．0kg／cm2 MnS040．01，尿素2(分消)，豆饼水解液20mL，VH0．6mg，VBl 1．2mg，pH6．7； 10min 1．0kg／cm2 1．2，Fes040．0l， 1．2．3基础发酵培养基：葡萄糖160，(N144)2S0410，KH2P04 20， MgSO,0．4，Mns040．01，VH60p．g，VBl3mg，Met0．1mg，豆饼水解液16，CaC03 · ·93 15min pH7．2；0．75kg／cm2 0．01， MgS040．4，MnS040．01，VH60／-,．g，Vm 20， 15min pH7．2；0．75kg／cm2 1．3培养方法 中，置于旋转式摇床上(200r／min)，31℃振荡培养44h。 1．3．2发酵培养：取上述种子培养液以10％接种量接至含30mL发酵培养基 的500mL三角瓶中，31℃振荡培养96h，发酵过程不断补加尿素以维持pH值。 1．4分析方法 1．4．1发酵液中残糖的测定：采用SBA-40A型系列生物传感分析仪测定。 1．4．2菌体生长测定：培养基不含碳酸钙时，用蒸馏水稀释20倍；培养基含 碳酸钙时，用2NHCl溶液稀释20倍，测定620nm波长下的吸光度。 1．4．3 L广异亮氨酸含量测定：采用纸上层析比色法、氨基酸自动分析仪测定。 2结果与讨论 2．1发酵培养基组成的优化试验 发酵培养基是供给生产菌种生长、繁殖和合成目的产物所需的营养物质。 培养基成分和其配比的合适与否对生产菌的生长发育、代谢产物的发酵合成、提 取工艺及最终产品的质量都产生相当大的影响。良好的培养基配比可充分发挥 生产菌种的生物合成能力，达到较大的生产效果，提高发酵效率。 本试验采用四因子(1／2实施)二次回归正交旋转组合设计[6]【7|，以L异亮 氨酸产