拉曼光谱分析有机氮源促进乙醇发酵的机制.pdfVIP

第42 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第10 期 2014 年10 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1471 ~1477 DOI:10.11895/j.issn.0253-3820.140515 拉曼光谱分析有机氮源促进乙醇发酵的机制 1,3 2 3 2 *1 *3 覃赵军 赖钧灼 彭立新 刘 斌 刘军贤 王桂文 1(广西师范大学 物理科学与技术学院,桂林 541004) 2(广西大学 生命科学与技术学院,南宁530004) (广西科学院生物物理实验室,南宁530007)3 摘 要 应用拉曼光谱和单细胞分析技术监测有机氮源尿素和酵母粉、无机氮源硝酸铵和硫酸铵对酿酒酵 母乙醇发酵的影响及发酵过程胞内主要生物大分子的变化动态,以期从光谱学角度获知有机氮源促进乙醇 发酵的机制。 结果表明,利用酵母粉和尿素的乙醇发酵速度最快,14 ~18h 即可达到乙醇浓度的最大值;在有 -1 机氮源下,酵母细胞的RNA合成无明显的迟滞期,发酵前期,782 cm 峰平均强度比无机氮源的高,其最大峰 强是初始强度的1.9~2.1倍,而无机氮源仅为1.2~1.4倍;以酵母粉为氮源的不同发酵阶段,部分细胞的蛋 白质二级结构以β 折叠为主,而其它氮源的细胞则是以α螺旋为绝对主导。 因此,尿素、酵母粉等有机氮源促 进乙醇发酵的可能原因是缩短酵母的迟滞期,促进胞内RNA 的快速合成,促进相关基因的快速转录和表达。 关键词 拉曼光谱;乙醇;酵母;氮源;单细胞分析 1 引 言 氮源是能提供微生物生长繁殖所需氮元素的营养源。 氮源对酿酒酵母的生长、产物的形成及其它 生理机能都有重要影响[1~3]。 在氮元素缺乏的情况下,细胞中的蛋白质及ATP含量相当低,严重影响 [4] 酿酒酵母的乙醇发酵能力 。 而乙醇发酵是一个动态过程,酵母细胞要经受不断变化的环境胁迫,其 [5] 应对环境变化的手段之一就是改变基因表达模式 。 鉴于氮源对乙醇发酵的影响重大,因此很多研究 聚焦在乙醇发酵过程中氮源对重要基因表达的影响方面,应用cDNA芯片技术可以监测发酵过程酵母 细胞RNA转录谱[6~10] ,但分析过程比较复杂、成本较高。 拉曼光谱作为一种实时无损而快速的检测技术,已经应用于乙醇发酵过程的实时在线监测[11~14]。 本研究组曾应用拉曼光谱技术,在单细胞水平上对乙醇发酵过程中的酵母细胞进行了研究[15~17] ,但在 应用光谱技术研究氮源对乙醇发酵的影响尚无报道。 本研究以有机氮源尿素和酵母粉、无机氮源硫酸铵和硝酸铵等作为氮源,应用单细胞拉曼光谱技术 初步分析氮源对酿酒酵母乙醇发酵过程中酵母的生长、产物的形成及其它生理特征的影响,从拉曼光谱 与单细胞的角度揭示有机氮源促进乙醇发酵的分子机制,比常规的分子生物学手段简便快捷,并发现了 常规的分子生物学手段无法观察到的胞内蛋白质二级结构变化的特殊现象。 2 实验部分 2.1 实验材料 菌种来源:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株GXAS-6 为广西科学院国家非粮生物质能源工 程中心筛选、保藏。 平板和种子培养基(YEPD):葡萄糖20 g,酵母提取物10 g,蛋白胨20 g,蒸馏水1000 mL,pH6.0。 发酵培养基:葡萄糖 150 g,CaCl 0.06 g,MgSO ·7H O 0.06 g,KH PO 1.5 g,蒸馏水 1000 mL