木薯淀粉分支酶基因双价块根特异性反义表达载体的构建.pdfVIP

第30卷第5期 热带作物学报 V01．30No．5 OFTROPICALCROPS 2009年5月 CHINESEJOURNAL May．2009 木薯淀粉分支酶基因双价块根特异性 反义表达载体的构建 肖 琼·一，郭运玲1，孔 华1，贺立卡1，郭安平1。 海口571101；’ ，裹昱蕃曩奢嚣荔耋荔羹秉圭黧葬妻霎蠢篓‘农业部热带作物生物技术重点开放实验室 一 2海南大学农学院．海口 570228 摘要淀粉分支酶(starch enzyme，SBE)是高等植物淀粉生物合成的关键酶之一，包括分支酶I(SBEI) branching 和分支酶II(SBEII)两种类型，调控着支链淀粉的合成。利用DNA重组技术，将这两种分支酶反义基因片段构建 动子之后。SBE，反义基因置于块根特异型启动子sporamin之后，两者具有各自的Nos终止子。通过反复冻融 法．将双价表达载体转入农杆菌EHAl05。并采用PCR技术对所构建的农杆菌工程菌株进行了鉴定分析。 关键词 木薯：淀粉分支酶基因；印orami凡启动子；反义双价表达载体；农杆菌工程菌株 中图分类号Q78 esculento 木薯fManihot 的75％。85％)．是热带、亚热带地区重要的生物质能源植物I-I。淀粉是木薯块根的主要成分，按结构差异 可将淀粉分为直链淀粉和支链淀粉．而直链淀粉和支链淀粉的比例影响着淀粉粒的结构和特点[2t。淀粉分支 酶(Starchbranching 连接．形成分支结构Pl。其主要影响着支链淀粉的合成，改变其酶活性而改变直链淀粉与支链淀粉的比例， II)两种类_型141。Yona等唧报道，在木 从而赋予淀粉新的理化特性。它又包括分支酶I(SBEI)和分支酶II(SBE 薯中SBEJ『和SBEH基因已经克隆出来。并且具有时间和组织表达的特异性。 随着现代生物技术手段的迅猛发展．RNA干扰技术提供了直接有效的人为控制基因表达的方法，是 对基因表达抑制的一种强有力手段161。近年来。在玉米、水稻上用RNA干扰技术降低其支链淀粉含量而提 高直链淀粉含量均有成功的报道嗍．而在木薯上的应用尚未见报道。本研究通过构建SBE双价块根特异性 反义表达载体及其农杆菌工程菌株．将用于转化木薯作物．以期在分子水平调节淀粉的生物合成，降低 或抑制淀粉分支酶基因的表达以影响细胞内酶的含量或活性．从而控制淀粉的结构。提高直链淀粉的含 量．以培育适合淀粉发酵用来生产酒精的木薯品种。 1 材料与方法 1．1 供试材料 1．1．1 菌株及质粒 大肠杆菌(Escheriachia tumefaciens) 动子跏or伽流质粒由北京大学林中平老师馈赠。 基金项目：中央级科研院所基本科研业务费项目(No．ITBBZD2007—2—3)资助。 作者简介：肖琼．女，1982年生，在读研究生。研究方向：作物遗传育种。 1@126．com． +通讯作者．郭安平，E-mail：gap21 收稿日期：2009-04—23修回日期：2009—05—12 5期 肖琼等：木薯淀粉分支酶基因双价块根特异性反义表达载体的构建 689 Mini 1．1．2生化试剂PlasmidKitI、GelExtraction Marker Kit购自OMEGA公司．T4DNAligase、DNA 海生工生物工程技术服务有限公司合成。 1．2方法 1．2．1 PCR引物设计引物由Prime