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牙鲆消化道组织学观察及内分泌细胞分布1 施志仪，陈晓武，顾一峰 上海水产大学生物技术研究中心，上海（200090 ） E-mail ：zyshi@ 摘 要：牙鲆（Paralichthys olivaceus ）体重约0.5kg ，活体取材，通过免疫组织化学染色和 H.E 染色，在光学显微镜下观察牙鲆消化道组织结构。结果表明，牙鲆消化道和高等脊椎动 物类似，分为食道、胃、胃盲囊和肠。肠也可分为前肠、中肠和后肠。三者之间没有明显的 界限。胃和前肠是消化吸收主要的区域。胃盲囊和前肠结构和功能非常类似。Serotonnin 细 4 2 胞和P Substance 细胞在牙鲆胃前部的粘膜中零星分布，在胃体中较多见，平均每10 µm 胃 体粘膜上皮约各有 2.2 和 2.0 个阳性细胞。而 Gastrin 细胞分布在胃盲囊和前肠中，平均每 4 2 10 µm 粘膜上皮分别有0.98 个和0.71 个阳性细胞。可见，牙鲆和哺乳动物消化道一样都分 布有肽能神经元。这些结果将为神经内分泌系统的研究提供资料。 关键词：牙鲆，消化道，内分泌细胞，免疫组织化学 牙鲆（Paralichthys olivaceus ）属鲽形目（Pleuronectiforms ）、牙鲆科（Paralichthyidae ）、 牙鲆属（Paralichthys ）的冷温性底层鱼类。是中国重要的海水养殖鱼类之一，其肉质鲜美、 营养价值高。同时，牙鲆二次变态显著，变态前后其外型、食性以及生态习性都发生了很大 的变化，是研究变态发育较理想的模式生物。 消化道的结构和功能的转变是食性改变的基础，牙鲆的胃在胚胎发育和变态前后有显著 的变化[1] 。目前未见关于牙鲆消化道组织结构和内分泌细胞分布的详细报道。5-羟色氨 （Serotonnin）细胞、胃泌素（Gastrin ）细胞和P 物质（P Substance ）细胞是在脊椎动物胃 肠道中广泛分布的内分泌细胞。其分泌物和胃肠道平滑肌收缩、胃粘膜分泌胃酸、蛋白酶和 胰酶分泌等生理活动都有密切关系。本研究采用免疫组织化学和 H.E 染色等方法，通过光 学显微镜观察牙鲆消化道组织形态，并在此基础上，对上述3 种内分泌细胞的分布进行观察, 以期为进一步研究牙鲆胚胎发育和变态发育中胃肠道结构和功能提供基础。 1. 材料与方法 1.1 材料和试剂 牙鲆于2004 年 11 月购自上海铜川路水产品市场，体重0.5kg 左右，打开腹腔，取消化 道的食道中部、食道与胃连接处、胃体、胃盲囊、前肠、中肠和后肠。所有组织材料均用不 含冰醋酸的Bouin 氏液固定，24h 后转入 70% 的酒精于4 ℃保存。Serotonin 、Gastrin 和P Substance 抗体（工作浓度为5% ）、SP 系列检测试剂盒均购自北京中杉生物技术公司，DAB 显色剂（工作浓度为0.05% ）购自武汉博士德生物技术公司。 1.2 染色 梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，做连续切片，厚度为8µm ，常规H.E 染色。免 疫组织化学染色方法参照SP 检测试剂盒说明书,过程如下: 切片脱蜡至水后以3 ％H2O2 灭活 内源性过氧化物酶lOmin，洗净后在室温下与山羊抗血清孵育 15min,再进入一抗 37℃中孵 育2h ，又分别在生物素化二抗和辣根酶标记链霉卵白素工作液中37℃下孵育 15min，最后 以DAB 显色。全部过程均在pH7.3 环境和湿盒中进行。每种抗体反应时均以相邻切片作为 1本课题得到国家自然科学基金项目（和高等教育博士项目科研基金（20040264001 ）的资助。 -1- 阴性对照。阴性对照除一抗以PBS 替代之外，其余步骤均同实验组。 1.3