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实验 1 双缩脲法测定血清总蛋白 湘南学院医学检验系 蒋显勇 表2-1 双缩脲法测定血清总蛋白 2．血清总蛋白浓度降低 （1）血浆稀释 血浆中水分增加，血浆被稀释。如静脉注射过多低渗溶液或各种原因引起的水钠潴留。 （2）营养不良或消耗增加 长期低蛋白饮食或慢性肠道疾病所引起的吸收不良使体内缺乏合成蛋白质的原料；长期患消耗性疾病，如严重结核病、恶性肿瘤和甲状腺功能亢进等，均可导致血清总蛋白浓度降低。 2．血清总蛋白浓度降低 （3）蛋白质合成障碍 当肝功能严重受损时，蛋白质合成减少，以清蛋白降低最为显著。 （4）蛋白质丢失 严重烧伤，大量血浆渗出；大出血；肾病综合征尿中长期丢失蛋白质；溃疡性结肠炎可从粪便中长期丢失一定量的蛋白质。 * * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验1 双缩脲法测定血清总蛋白 实验目的 掌握：双缩脲法测定血清总蛋白含量的原理和方法 。 熟悉：测定血清总蛋白含量的注意事项及临床意义。 了解：了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点。 实验原理 血清（浆）中蛋白质的肽键（-CO-NH-）在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。 这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，其吸光度与血清蛋白含量在一定范围内呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。 试剂与器材 1．6.0mol/L NaOH溶液。 2．双缩脲试剂。 3．双缩脲空白试剂。 4．蛋白质标准液。 5．自动生化分析仪或分光光度计。 操作步骤 1．生化自动分析仪法 按试剂盒说明书提供的参数进行操作。 2．手工操作法 取试管5支，标明测定管（U）、标本空白管（B）、标准管（S）、试剂空白标准空白管（SB）、（RB），按2-1表操作。 混匀，置25℃30min或37℃10min，在波长540nm处比色，用蒸馏水调零，测各管吸光度。 － 5.0 － 5.0 － 双缩脲空白试剂 5.0 － 5.0 － 5.0 双缩脲试剂 － － － － 0.10 蒸馏水 0.10 0.10 － － － 蛋白标准液 － － 0.10 0.10 － 血清 S SB U B RB 加入物(ml) 计算 参考范围 健康成人走动后血清总蛋白浓度64g/L～83g/L； 健康成人静卧时血清总蛋白浓度60g/L～78g/L。 临床意义 1．血清总蛋白浓度增高 （1）血浆浓缩 凡体内水分的排出大于摄入时，均可引起血浆浓缩。如急性脱水（如呕吐、腹泻、高烧等），外伤性休克（毛细血管通透性增大），慢性肾上腺皮质功能减退（尿排钠增多引起继发性失水）。 （2）蛋白质合成增加 多见于多发性骨髓瘤患者，此时主要是异常球蛋白增加，使血清总蛋白增加。 注意事项 1．黄疸血清、严重溶血、葡聚糖、酚酞及溴磺酞 钠对本法有较大干扰，可以用标本空白管来消 除。 2．高脂血症患者的混浊血清会干扰比色测定。 3．本法也可用于血清总蛋白浓度的标化 。 评价 优点：本法为测定血清总蛋白的常规推荐方法。 重复性较好，干扰较少，操作简便、快速， 用单一的稳定试剂，既适于手工操作，也便 于自动化分析。 缺点：灵敏度较低，比酚试剂法约低100倍。 但本法的检出限为0.2 g/L～1.7g/L，相当于70g/L的血清3μl～24μl，已能满足临床生化检验的需要。