流式细胞仪检测高等植物细胞核DNA含量的方法 (1).pdfVIP

植物科学学报 2015，33(1)：126～131 P|antScienceJournal DOI：1o．11913／PSJ．2095-0837．2015．10126 流式细胞仪检测高等植物细胞核 DNA含量的方法 汪艳 ，肖媛，刘伟，李婷婷，胡锐，乔志仙 (中国科学院水生生物研究所分析测试中心，武汉 430070) 摘 要：相对于动物和微生物而言，流式细胞术在植物科学上的应用会因植物组织与细胞 (如细胞壁、中央液 泡、特殊细胞器等)的特殊结构以及次生代谢产物等特殊成分 ，造成样品在前期处理、染色及测试等方面的困 难，甚至导致检测失败或结果不准确。笔者在长期运用流式细胞仪测试工作中，积累了大量的植物样本检测经 验，并参考国内外相关文献 ，总结出从植物取材、样品制备到植物细胞核DNA流式检测的方法和技巧，可为植 物科学研究者及从事流式细胞检测的技术人员提供实验参考。 关键词 ：流式细胞术；高等植物；细胞核DNA含量；DNA解离液 中图分类号：Q343；O65 文献标识码 ：A 文章编号：2095-0837(2015)01—0126-06 OperationSkillsofFlow CytometerforDetecting NuclearDNA ContentsinHigherPlantCells WANG Yan ，XIAO Yuan，LIU Wei，LITing—Ting，HU Rui，QiaoZhi—Xian (Ana isandTestingCenter，InstituteofHydrobiology，ChineseAcademyofSciences，Wuhan430070，China) Abstract：Compared to animalsand microorganisms，the applicationofflow cytometry for plantscienceisquitedifficultinregardstosamplepreparation，dyeingandtesting，whichcan leadtofailureindetectionorinaccurateresults，duetothespecialstructuresandingredients ofplantmaterial(e．g．，cellwalls，centralvacuoles，multifariousorganellesandsecondary metabolites)．Throughlong—term useofflow cytometryandreferencetorelatedliterature，we accumulated significant experience in plantscience，especially in specimen collection， samplepreparationand nuclearDNA contentdetection．Accordingly，thisreportprovides a valuablereferenceforplantscienceandtechnicalpersonnelengagedinflow cytometrytesting． Keywords：Flow cytometry (FCM)；Higherplant；CellnuclearDNAcontent；DNA isolation blJffer 流式细胞仪(flowcytometer)的诞生标志着在 立、流式样品制备技术的不断更新．流式细胞术在 单细胞水平上定性、定量分析及分选检测技能的快 植物科学领域如植物遗传育种、植物染色体分析与 速发展，并在血液学、免疫学、肿瘤学、分子生物 文库构建、逆境植物学、植物分类学、植物病理学 学和细胞生物学等学科的基础研究及临床检验中得 等各个学科中显示出广阔的应用前景 ．]。