哈氏弧菌EcGY020401优化培养.pdf

疆毽蠹n 第三届海洋生物高技术抡坛 2005．08．19-23 哈氏弧菌EcGY020401优化培养+ 陶家发吴淑勤’石存斌潘厚军 (中国水产科学研究院珠江水产研究所， 广东省水产动物免疫技术重点实验室，广州510380) 摘要：在确定TSB培养基较适合哈氏弧菌(Vibrio 研究了几个主要因子对EcGY020401株生长的影响，通过实验确定，最适盐度为2¨259，L， 合适的pH为7．5～7．7，葡萄糖最适浓度为2～5 g／L。对TSB培养基组分进行了优化组合， 为降低培养基原料成本，用成本较低的蛋白胨部分代替价格高的胰蛋白胨，添加少量酵母膏， 确定了一个优化培养基，培养基组成为：胰蛋白胨59／L、蛋白胨159／L、大豆蛋白胨aWL、 的效果为优，但不如起始培养液pH7．5、发酵培养过程中不控制pH的培养效果。用5L发酵 h左右。 罐培养EcGY020401株，接种量10％时，生长达到最高峰的时间为10 关键词：哈氏弧菌，培养，优化 病原性弧菌是海水养殖动物最重要的细菌性病原，已报道的弧菌病的病原包括创伤弧菌 证，一般常见弧菌的适：宣生长温度为28℃，较适：白：的培养基为胰大豆蛋白胨(TSB)培养基。 为了更好地培养海水养殖鱼类致病性弧菌，提高生物得率，降低疫苗制备成本，为工厂化生 产弧菌疫苗提供理论依据和技术支持，通过一系列的实验，明确了哈氏弧菌培养过程中适宜 pH、盐度以及葡萄糖浓度对哈氏弧菌生长的影响，并对胰大豆蛋白胨培养基成分进行了优化， 在5L自动发酵罐进行培养实验，获得了一些规模化培养哈氏弧菌的技术参数。 1材料与方法 1．1实验材料 脏中分离得到。 1．1．2基础培养基胰大豆蛋白胨培养基(TSB)，其配方为：胰蛋白胨179／L、大豆蛋白胨 39／L、葡萄糖2．5g／L、磷酸氢一钾2．59／L、氯化钠159／L，pH7．2—7．4。 1．2实验方法 1．2．1 盐度对生长的影响 将TSB培养基的NaCI调整为10 g／L、15g／L、20g／L、25g／L、30g／L，灭菌后，分别接 种子液(10％接种量)，28℃，180dmin，振荡培养24h，平板计数法测定培养液的活菌数。 1．2．2 pH对生长的影响 半通讯作肯，E．mail：wushuqin00l@21cn．COn) 162 禳建蠹n。 第三届海洋生物高技术论坛 200s．08．19．23 pH8．0，方法如上。 1．2．3葡萄糖对生长的影响 将TSB培养基中的葡萄糖浓度分别配制为0、2．5、5．0、7．5、10 g／L，其他组分不变， 方法如上。 1．2．4 TSB培养基的优化 在TSB培养基配方的基础上，用蛋白胨代替部分胰蛋白胨，并添加少量酵母膏。以胰蛋 白胨+蛋白胨(15+5、10+10、5+15g／L)、大豆蛋白胨(3、2、1g／L)、酵母膏(5、3、1g／L)、 葡萄糖(4、3、2 g／L)，做4因素3水平(43)正交实验。根据相应的实验设计，配制不同组 活菌数，通过极差讨‘算，确定合适的组分配比。如上方法，比较TSB和改良的TSB培养基 (pH7．5，培养基盐度为15g／L)的培养效果。 1．2．5 发酵培养控制pH对生长的影响 菌株斜面28。C，培养24h，挑菌苔，接种三角瓶，28C，200dmin，振荡培养24h，种 子液接种5L发酵罐(装液最70％)，28C，350r／min，发酵培养10h。发酵过程中培养液pH 自动控制为7．2、7．5、7．8和发酵培养过程不控制pH(培养基起始pH为7．5)。 1．2．6发酵培养时EcGY020401株的生长曲线 取培养液，稀释20倍，650nm测定光吸收值。 2结果与分析 2．1盐度对生长的影响 哈氏弧菌EcGY020401株在培养基盐度10、15、20、25、30