第三代端粒酶缺失小鼠皮肤表皮干细胞分离培养特性观察 (1).pdf

762 TianjinMedJAugust2014，Vo1．42No．8 ， 实验研究 第三代端粒酶缺失小鼠皮肤表皮干细胞分离培养 特性观察 张俊伶 黄 颂 路 璐 李德冠 吴红英 孟爱民 摘【要】 目的 观察第三代端粒酶缺失(G3Terc一)小鼠与野生型(wT)小鼠皮肤表皮干细胞数目及功能差异。 方法 利用流式细胞术对皮肤表皮干细胞进行数 目分析及分选；实时定量PCR方法检测p21基因表达；表皮干细胞 克隆形成数 目检测细胞 自我更新能力。结果 wT小 鼠基底部表皮干细胞与基底部上层表皮干细胞比例分别为 (9．56~1．O6)％和(1．22~0．08)％，在G3Terc一小鼠中这两部分细胞 比例分别为(17．36~3．56)％和 (2．92~0．72)％； G3Terc一小鼠p21相对表达水平为wT小鼠的6．4倍 ；wT小鼠每104个表皮干细胞能够形成(280．20~29．81)个克隆， G3Terc小 鼠每 104表皮干细胞仅能够形成 (29．28~5．24)个克隆，以上结果差异均有统计学意义(均P0．05)。 结论 与wT小鼠比较，G3Terc一小鼠皮肤表皮干细胞出现衰老性的损伤。 【关键词】 小民基因敲除；皮肤衰老；干细胞；端粒，末端转移酶 【中图分类号】 Q255 【文献标志码】A D【OI】 10．3969~．issn．0253-9896．2014．08．008 lsolationandCultureofEpidermaIStem CellsfrOm theThirdGenerationofMiceThatWere Kn0cked—OutOf7_erc ZHANGJunling，HUANGSong，LULu，LIDeguan，WUHongying，MENGAimin InstituteofRadiationMedicine，ChineseAcademyofMedicalSciences，theKeyLaboratoryofRadiationMedicineand MolecularNuclearMedicine，Tianjin300192，China MENGAimin,E—mail：aimin meng@126．com _ _ A【bstract】 0bjective Toobservethedifferenceinnumberofepidermalstemcellanditsfunctionbetweenwild— type(WT)miceandthethirdgenerationofTercknockout(G3Terc)mice．Methods Flowcytometrywasusedtoanalyse andsortepidemralstemcells；Quantitativereal—。timePCRisusedtoanalysetherelativeexpressionlevelofp21inepider- malstem cells；Self-renewalabilitywasreflectedbythenumberofcoloniesfomr edbyepidemr alstem cells．Results Basal andsuprabasalratiosinepidermalstemcellsinWTmicew