大鼠冠状动脉平滑肌细胞的分离及电压依赖性钾通道电流特性的初步研究.pdfVIP

- 56 · 中国心脏起搏与心电生理杂志2013年第27卷第 1期 大鼠冠状动脉平滑肌细胞的分离及 电压 依赖性钾通道 电流特性的初步研究 林佳 韩莲花 郑冬冬 杨向军 宋建平 蒋廷波 蒋文平 [摘要] 目的 建立一种稳定、高效的大鼠冠状动脉平滑肌细胞 (CASMCs)的急性酶分离方法，并对其电压依赖 性钾离子通道 (K)进行研究。方法 采用 “三步”(依次用3种分离酶液)急性酶分离方法分离大鼠CASMCs，并 进行细胞鉴定，采用膜片钳记录K 电流。结果 ①本分离方法可以获得数量较多，活性较好的平滑肌细胞；②测 试电位为+60mV时，K 电流密度达到最大值34．35+2．53pA／pF，加入4一氨基吡啶后电流密度降至3．55~0．47pA／ pF。两组之间电流密度的差异具有显著性 (n=5，P0．05)。K 稳态激活曲线的半数激活电压 V1=23．66~1．03 mV，曲线斜率因子 k：14．44±0．94mV。结论 “三步”法为使用膜片钳记录 CASMCs的离子通道 电流提供了较好 的研究方法。 [关键词] 心血管病学；冠状动脉；电生理；电压依赖性钾离子通道；血管平滑肌细胞 DOI：10．7695／zgxzqb201301017 网络出版时间：2013—2—715：09 网络出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／42．1421．R1509．017．html 中图分类号 R331．38 文献标识码 A 文章编号 1007-2659(2013)01-0056—04 Isolationofratcoronaryarterialsmooth musclecellsandpreliminarystudyofthecharacteristicsofthevoltagede- pendentpotassium channe1．LINJia，HANLian—hua，ZHENGDong—dong，YANGXiang—jIln，SONGJian—ping，JIANG Ting—bo．JIANGWen—ping．DepartmentofCardiology，FirstHospitalofSoochowUniversity，Suzhou215006，Jiangsu，China Correspondingauthor：JIANGWen—ping，Email：Jiangwenping2002@yahoo．con．cn [Abstract] Objective Toestablishastableandefficientenzymeseparationmethodtoisolationofratcoronaryartery smoothmusclecells(CASMCs)，andtostudyonthevoltagedependentpotassium ionchannels(Kv)． Methods CASMCswereisolatedbya”three—step”acuteenzymeseparationmethodandidentifiedby immunofluorescence．Kvcur- rentswererecordedbythepatch—clamptechnique． Results ①AnabundanceofCAMSCswithgoodreactivitywereob— tainedbythismethod．②Atthetestpotentialof+60mV，theKvcurrentaveragecurrentdensitieswere34．35~2．53pAV pF(n=5)．Afteradded4-AP，theKvcurrentaveragecurrentdensitieswere3．55_+0．47pA／pFatthesametestpotential (P0．05)．Thehalfmaximalactivationvoltagewas23．66~1．03mV，andtheslopevalue(k)Was 14．44±0．94mV． Conclusions：ThismethodcanacquirealargenumberofCASMCswh