漆酶固定化的研究动态及应用前景.pdfVIP

生物学教学2012年(第37卷)第6期 · 9 · 漆酶 固定化的研究动态及应用前景 杜东霞 (菏泽学院生命科学系 山东 274015) 摘 要 本文概述了漆酶固定化的基本方法，着重介绍了漆酶固定化的创新和发展，并对其应用前景进行了展望。 关键词 漆酶 固定化 应用前景 漆酶是一类最简单的多铜氧化酶，它能催化分子 2Cu +1／202+2H 2Cu +H20 氧氧化分解多种酚类化合物¨j。漆酶的催化 中心一 上述反应 中漆酶催化底物氧化分解和对 O2的还 般含有4个铜原子，根据其光谱特征可以将它们划分 原是通过4个铜离子协同传递电子和价态变化来实现 为三种类型，每种类型的铜在氧化反应 中执行着不同 的，还原性底物先与 I型铜位点结合，I型铜从底物中 的功能：类型 I(蓝铜)催化分子内的电子传递，能将 摄取一个电子，使之形成 自由基，并将电子传递给邻近 电子从底物传递到邻近铜原子上，在614nm处有特征吸 铜原子 (Ⅱ型铜和Ⅲ型铜)，邻近铜原子结合第二个底 收带；类型Ⅱ参与分子氧的激活，无特征吸收峰；类型Ⅲ是 物分子氧，并使之还原成水_6j。 2个铜原子组成的二聚体，负责分子氧的摄取 ，在330nm 1 漆酶固定化的基本方法 处有吸收峰 【。参照 Latour等 和 Yaropolov等1J的 漆酶固定化可以分为物理方法和化学方法，其中 分子反应模型，以邻苯二酚氧化降解为例，下面的两个 物理方法主要包括物理吸附法、离子吸附法和包埋法 反应式反映了催化反应的电子传递规律 5【J： 等；化学方法一般包括共价结合法和交联法等 【。有 2Cu¨+benzendiol(邻苯二酚)-÷2cu +quinine 关漆酶固定化方法的报道较多，这里不再赘述，本文仅 (苯醌)+2H 对各种方法进行了较为系统的比较 (表 1)。 表 1 各种固定化方法特点的比较 2 新型固定化漆酶技术的创新和发展 沉淀和化学交联两步组成 ，首先 向处于溶解状态的酶 2．1 交联酶聚集体技术 交联酶聚集体 (cross— 溶液中加入适宜的蛋白质沉淀剂制备酶沉淀聚集体， linkedenzymeaggregates，CLEAs)是由荷兰德尔福特理 随后加入交联剂(通常为戊二醛)进行交联，交联剂戊 工大学的Cao等[8]于2000年率先提 出的一种新型的 二醛的醛基和酶沉淀聚集体的氨基发生 Schiff碱反 酶固定化技术。其原理见图 1E9]，该技术通常 由物理 应 ，从而制备出颗粒大小为 l～lO0~m 的不溶于水 的 沉淀 。 毫搽螺翦誉 黪．姻：露|『， 溶液中的游离酶 (颗 酶沉淀聚集体 (颗 交联酶聚集体 (颗粒 粒大小约为5nm) 粒大小约为l岫1) 大小约为l~lO0~m) 图1 交联酶聚集体的制备 (本文受全 国教育科学规划教育部重点课题基金， 北京：科学技术文献出版社 No．GOAl06002资助； 通讯作者) [2]廖苏梅，曾立等(译)．2008．[美]奥尔顿 ·比格斯等．科学发现 者．生物 ·生命的动力．杭州：浙江教育出版社 主要参考文献 [3]李高峰，刘恩山．2009．美国 《国家教育科学标准》倡导的