脂多糖对脊髓前角运动神经元的损伤作用.PDFVIP

细胞生物学杂志 Chinese Journal of Cell Biology 2008, 30: 114-120 脂多糖对脊髓前角运动神经元的损伤作用 1 1,2 1 1,2 1,2 1 1,2 李 彬 　董 惠 　李 哲　卜 晖 　刘晓云 　孙萌萌 　李春岩 * 1 2 (河北医科大学第二医院神经内科,石家庄 050000;河北省心脑血管病研究所,石家庄 050000) 摘要　　研究脂多糖(LPS)诱导的炎症反应对运动神经元的损伤作用及其机制。采用SD乳鼠 脊髓器官型培养,分为单纯培养液组和不同浓度LPS组,应用免疫组化、酶活性测定、电镜等技 术衡量神经元损伤程度。对LPS组分别给予细胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM和NADPH氧化酶抑 制剂apocynin,观察运动神经元数量和形态变化。结果显示LPS可以引起剂量和时间依赖性的运 动神经元数量减少和培养液中乳酸脱氢酶含量增高,运动神经元超微结构改变明显,中间神经元损 伤相对较轻。运动神经元缺乏钙网膜蛋白表达,而BAPTA-AM减轻运动神经元损伤,提示钙离子 缓冲能力较低是其较易受损的原因之一。LPS可以引起NADPH氧化酶活性增高,而apocynin对LPS 引起的运动神经元丢失有保护作用,说明NADPH氧化酶在炎症介导的运动神经元损伤中发挥着关 键作用。 关键词　　肌萎缩侧索硬化;器官型培养;脂多糖;运动神经元; NADPH氧化酶 肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis, ALS)是以选择性运动神经元受损为特点的慢性进行 (Merck),小鼠抗非磷酸化神经丝单克隆抗体SMI-32 性变性疾病, 目前病因及发病机制尚不十分清楚。 (Sternberger Monoclonals),山羊抗钙(视)网膜蛋白 越来越多的证据显示,运动神经元的选择性丢失并非 (calretinin)多克隆抗体、兔抗p47phox多克隆抗体和 [1~3] 小鼠抗-肌动蛋白多克隆抗体(Santa Cruz),生物素 细胞自主性的 。在ALS患者和人类突变SOD1转 基因鼠脊髓组织中,存在大量激活的小胶质细胞、 化马抗小鼠IgG、兔抗山羊IgG和SABC试剂 反应性星型胶质细胞、炎性细胞因子以及趋化因子 (Vector), DAB显色试剂盒(北京中山化学试剂公司), [4~7] LDH测定试剂盒(南京建成生物工程研究所), BCA蛋 等 ,并且ICAM-1表达增多和小胶质细胞激活等出 [5] 白定量试剂盒(Novagen)。 现在大量运动神经元丢失之前 。对ALS患者血 清、皮肤及肌肉的分析结果显示机体存在广泛的炎 1.2脊髓器官型培养 [8~12] G37R [14] [15] 症反应 。在SOD1转基因小鼠中,给予脂多糖 参照Rothstein等 及本室建立的方法 ,将7日 (lipopolysaccharide, LPS)腹腔注射,激活天然免疫系 龄SD乳鼠在无菌条件下断头取出脊髓,解剖显微镜 [13] 下迅速分离神经根,用活组织切片机 统,可加速疾病的进展 。这些均提示炎症反应可 能参与了运动神经元损伤,但其确切作用及具体机制 将腰段脊髓切 还不明确。 成350m厚的薄片,将脊髓薄片转移到Gey’s平衡 LPS是革兰氏阴性杆菌细胞壁的主要成分,通过 盐液(含葡萄糖6.4 mg/ml)中分离成单片, 6孔培养板 Toll样受体4,激活机体的天然防御系统,引起炎症反 内每孔加入1 ml培养液(50%MEM含25 mmol/L 应。本研究应用LPS,利用器官型脊髓薄片培养技