铜绿假单胞菌LexA蛋白的纯化及免疫活性分析.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（５）：１０７～１１２ 铜绿假单胞菌ＬｅｘＡ蛋白的纯化及免疫活性分析  陈　炫 　汤绍辉　唐　晖　查庆兵　刘　芳 （暨南大学附属第一医院临床实验中心　广州　５１０６３２） 摘要　目的：对铜绿假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，ＰＡ）的ＬｅｘＡ蛋白进行表达、纯化，并检测其 免疫活性。方法：ｌｅｘＡ基因片段插入表达载体ｐＥＴ３２ａ（＋），在Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中表达。包涵 体经洗涤并用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解，镍离子亲合柱层析为第一步纯化，Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５凝胶过滤层析作为 第二步精细纯化，ＨＰＬＣ测定蛋白的浓度，将纯化的ＬｅｘＡ蛋白经注射途径免疫家兔，制备兔抗 ＬｅｘＡ血清，采用免疫双扩、ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析ＬｅｘＡ的免疫活性。结果：ＬｅｘＡ以包涵体形 式表达，经镍离子亲合柱层析和凝胶过滤层析二步组合纯化目的蛋白，经ＨＰＬＣ测定目的蛋白的 最终纯度为９８．９７％，表达及纯化的ＬｅｘＡ具有良好的免疫活性。 关键词　铜绿假