血清学诊断中结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶的应用.pdfVIP

l’f； 微生物学报 ActaMicrobiologicaSinica 48f】0)： 1383～1386；4October2008 ISSN0001-6·209；CN11--1995／Q http：／j／ournals．im．ac．cn 血清学诊断中结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶的应用 柏雪莲 ，魏庆宽2，李瑾2李桂萍 (山东省滨州医学院病原生物学教研室，滨州 256603) (山东省寄生虫病防治研究所 ，济宁 272033) 摘要： 【目的】在原核系统中表达结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶 (phosphoen0lpyruvatecar— boxykinasePEPCK)，并研究该蛋白在诊断结核病人血清抗体中的应用价值。【方法】应用基因重组 技术表达重组蛋 白结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶，经亲和层析法纯化表达产物 。用表达的重组 蛋白免疫小鼠，研究其免疫学特性。间接酶联免疫吸附试验 (Enzymelinkimmunosorbentassay， ELISA)检测结核病人血清中特异性 IgG抗体，并与结核杆菌抗体胶体金法诊断试剂盒检测结果对 比。【结果】试验表明转化人大肠杆菌中的重组质粒能够表达并纯化出相对分子量为72kDa的重组 蛋白；Westernblot证实重组蛋白能够与小鼠抗 BCG血清发生特异性反应；重组蛋白免疫小鼠后 ， 小鼠血清中的抗体滴度可达 1：1280以上；重组蛋白用作 ELISA包被抗原检测病人血清阳性率为 l7．3％ (30／173)，其中排菌病人的阳性率为 32．5％ (134／2)，不排菌病人的阳性率为 12．9％。该方法结 果与结核杆菌抗体胶体金法诊断试剂盒的检测结果相比，敏感性为 51．0％，特异性为 96．7％。【结论】 结核杆菌PEPCK具有较好的免疫原性和抗原性，有可能作为结核病血清学诊断的一组抗原之一。 关键词：结核杆菌；磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶 (PEPCK)；血清学诊断；酶联免疫吸附试验 中图分类号：Q93—3 文献标识码：A 文章编号：0001—6209(2008)10—1383—04 结核病(Tuberculosis)是由结核杆菌(Mycobacterium PEPCK在结核病诊断中的应用价值 ，为寻找新的结 tuberculosisM．tb)感染所致的对人类健康危害最大的 核病诊断方法提供线索。 慢性传染病。世界上约有 1／3的人感染，每年约 8百 万人发病，2百万人死亡。近年来随着结核病的再次 1 材料和方法 回升，及时 、正确的诊断结核病对于控制结核病的流 1．1 材料 行非常重要。南于传统的结核菌素实验不能区分现行 1．1．1 质粒和菌株 ：带有pckA基因片断的重组质粒 感染和既往感染，因此众多的学者在积极的寻找一种 pHF／pckA 由美国康耐尔大学提供 ；大肠杆菌 HB川 特异性强、灵敏度高的诊断方法以代替传统的结核菌 (EscherichiacoliHB川，E．coliHB )购于中国科学院 素实验。前期研究发现结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧 微生物研究所。 激酶(PEPCK)是结核杆菌生长所必需的关键酶ll一1，且 1．1．2 小鼠：6～8周龄，18～22g清洁级纯种BALB／c 能诱导很强的细胞免疫反应。本研究利用生物工程技 小鼠，购于山东大学医学院实验动物中心。 术，在大肠杆菌中表达出结核杆菌 PEPCK，用其免 1．1．3 血清：结核病人血清 173例，其中排菌病人42例， 疫小鼠，研究其诱导抗体产生能力，并将 PEPCK用 不排菌病人 131例，正常体检者血清20例，以上血清由 作抗原 ，通过 ELISA检测结核病人的血清，以评价 由山东省胸科医院和济宁市结核病防治研究所提供。 基金项目：国家自然科学基金(3034