多西紫杉醇对人大肠癌HT-29细胞增殖及凋亡的作用.docVIP

精品论文 参考文献 多西紫杉醇对人大肠癌HT-29细胞增殖及凋亡的作用 朱海成 赵宝忠 邱运梅 朱元廷（牡丹江市肛肠医院 黑龙江牡丹江 157013） 【中图分类号】R979.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）15-0094-02 【摘要】目的 探讨多西紫杉醇（docetaxel）对人大肠癌细胞增殖的抑制作用。方法 应用MTT法和流式细胞术检测不同浓度的多西紫杉醇作用HT-29细胞后增殖抑制率、细胞周期及凋亡率。结果 多西紫杉醇对HT-29细胞增殖有抑制作用，且呈时间－浓度量效依赖性，随浓度增加，细胞周期亦有明显变化，凋亡率逐渐上升，用药组之间比较差异显著。结论 多西紫杉醇可抑制大肠癌HT-29细胞增殖，改变细胞周期且诱导凋亡。 【关键词】多西紫杉醇 大肠癌 增殖抑制/凋亡 本研究旨在探讨多西紫杉醇对体外培养人大肠癌HT-29细胞的生长的影响，为其在临床的实用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1材料 人大肠癌细胞株HT－29（中国科学院上海生物细胞研究所）；多西紫杉醇（法国安万特公司）；四甲基偶氮唑蓝MTT（Sigma）；RPMI1640培养基（Gibco）；小牛血清（杭州四季青生物材料研究所）；FACScant型流式细胞仪（美国Becton-Dickinson公司产品）。 1.2仪器与设备 CO2培养箱（日本三洋）；超净工作台（苏州苏净集团安泰公司）；倒置荧光显微镜（日本OLYMPUS）；酶标自动分析仪BIO-RAD550型（美国）；台式离心机（eppendorf公司）；电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）； 1.3方法 1.3.1细胞培养：细胞培养在含有10％小牛血清的RPMI1640培养液中，加入青霉素100u/L，链霉素100mg/L，置于37℃，5％CO2培养箱中培养，每3d～4d用0.25%胰酶消化传代1次，取对数生长期细胞用于实验。 1.3.2多西紫杉醇对细胞生长的影响 实验组中分别加入含多西紫杉醇1.25-40mu;g/ml，每组设6个复孔，对照组加等量的培养液。连续培养24h。实验结束前4h每孔加入20mu;lMTT液显色，继续培养4h后每孔加入200mu;lDMSO，用酶标仪测定570nm处各孔的吸光度数值，计算抑制率＝（对照组平均A值－实验组平均A值/对照组平均A值）times;100％。 1.3.3细胞形态观察 取对数生长期的HT-29细胞换含不同浓度的多西紫杉醇的培养液培养，倒置显微镜下观察细胞生长情况。制备细胞爬片标本，常规HE染色。 1.3.4流式细胞仪检测细胞周期各时相的变化 选择对数生长期HT-29细胞，调整细胞数为3times;105个／ml接种6孔培养板中，每孔2ml，24h后更换含有2.5、5、10、40mu;g/ml多西紫杉醇的培养液，每组6个复孔，培养24小时后制成单细胞悬液，离心，弃上清，用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，固定。800rpm15分钟收集固定的细胞，PBS洗2次；用0.5ml PBS重悬细胞并转至试管中轻轻吹打；Rnase-A至终浓度约50mu;g/ml，37 ℃水浴30分钟；加PI至终浓度为65mu;g/ml，避光染色30分钟，过滤，用FACSort流式细胞仪上机检测，细胞增殖抑制率（PCI）：PCI=[（对照组S+G2M-用药组S+G2M）divide;对照组S+G2M]times;100%。 1.4统计学处理 本实验数据采用Xplusmn;s表示，应用SPSS软件进行统计学分析。 2 结果 2.1多西紫杉醇对HT-29细胞生长的抑制作用 于药物处理后24h采用MTT法测得各组的抑制率（IR），结果表明：多西紫杉醇在2.5-10mu;g/ml浓度范围内对HT-29细胞均有抑制作用，药物浓度越高，作用时间越长，其抑制作用越明显（表1）。 表1 多西紫杉醇对结肠癌HT-29细胞增殖的影响（Xplusmn;s） 组别 浓度（mu;g/ml） OD值 抑制率% 对照组 0 0.542plusmn;0.068 / 给药组 1.25 0.487plusmn;0.062 10.015 2.5