精品第四章酶的固定化.pptVIP

* * * (1)相对酶活力: 具有相同酶蛋白量的固定化酶与游离酶活力的比值称为相对酶活力. 它与载体结构、颗粒大小、底物分子量大小及酶的结合效率有关. 相对酶活力低于75%的固定化酶,一般没有实际应用价值。 四 固定化酶的指标 * (2)酶的活力回收率: 固定化酶的总活力与用于固定化的酶的活力之百分比称为酶的活力回收率 将酶进行固定化时, 总有一部分酶没有与载体结合在一起, 测定酶的活力回收率可以确固定化的效果.一般情况下,活力 回收率应小于1, 若大于1可能由于固定化活细胞增殖或某些抑制因素排除的结果. * (3). 酶固定化效果的测定 固定化酶活力测定基本上与溶液酶相似，也以反应初速度表示．即每毫克干重固定化酶每分钟转化1umol底物量或形成1umol产物的酶量为一个单位(umol/mg·min)，对于酶管、酶膜、酶板等，则以单位面积（cm2）的初速度来表示。 * 4. 固定化酶半衰期:固定化酶的活力下降到初始活力一半所经历的时间,用t2/1表示，衡量固定化酶操作稳定性的关键。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第五章酶工程与食品科学 之 酶的固定化 * 为什么要进行酶的固定化: 稳定性差 催化结束后难以回收 目前固定化对象: 从酶扩增到微生物或动植物细胞和各种细胞器 　第一个将固定化细胞用于工业化：１９７３年日本千田一郎，用于连续化生产Ｌ－天冬氨酸． * 中国：１９９４年，江苏某高校在世界上首次实现大规模固定化微生物细胞工业化生产天然食品添加剂酒石酸（现达到5,000吨/年，国家火炬计划项目2004EB020341），改变了单一依靠葡萄酒酒石提取的传统工艺。目前世界上只有中国能用生物技术方法生产L-酒石酸。 * 什么是固定化酶？ 水溶性酶 水不溶性载体 水不溶性酶 （固定化酶） 固定化技术 * 化学偶联 酶 固定化 间歇 可溶 交联 包埋 吸附 间歇 连续 酶的固定化技术 * 固定化酶的特点： 优点： 不溶于水，易于与产物分离； 可反复使用； 可连续化生产； 稳定性好。 缺点： 固定化过程中往往会引起酶的失活 * 一、酶的固定化方法 载体结合法 物理吸附 离子吸附 鏊合法 共价结合法 2、共价交联 3、包埋法 * a. 物理吸附法:是制备固定化酶最早采用的方法，它以固体表面物理吸附为依据，使酶一水不溶性载体相接触而达到酶吸附的目的 1、载体结合法 优点：固定化时酶分子的构象很少或基本不发生变化。 缺点：结合力弱(物理吸附)，易解吸附。 载体：纤维素、琼脂糖、活性炭、沸石及硅胶等。 * b. 离子吸附法 通过离子效应将酶分子固定到含有离子交换基团的固相载体. 其实质不溶性离子化合物(离子交换剂)上的可交换离子与溶液中的其它同性离子的交换反应，是一种特殊的吸附过程，是可逆性化学吸附。 第一个离子吸附法固定化酶： DEAE(二乙氨基乙醇 )— Cellulose（纤维素） 固定化过氧化氢酶 第一个工业化的固定化酶： DEAE-Sephadex A-50 固定化氨基酰化酶 * 优点：反应条件温和，固定化酶活性高。 缺点：结合不牢固，酶在高浓度底物，高离 子强度或pH变化时易脱落。 载体：DEAE-纤维素、CM（甲基）-衍生物等 * * C、金属的氢氧化物和氧化物 利用螫合作用将酶直接赘合到表面含过渡金属化合物的载体上，具有较高的操作稳定性。 能与酶中的羧基，羟基和氨基结合． 螫合作用：某些有机化合物中，其部份相邻原子上，互有多余的电子对，可与外来的二价金属离子(例如ni2+，co2+，cu2+ 等)共同组成环状(ring)，类似螃蟹的两支大螯般共同夹住外物一样，称之为螫合作用。具有这种功能的化合物者，称为chelating agent。如edta(乙二胺基四醋酸)，eta等都是常见的螯合剂  * d. 共价结合法 共价结合法是通过酶分子上的功能团，与载体表面上的反应基团发生化学反应形成共价键的一种固定化方法，是研究最多的固定化方法之一。  优点；结合牢固 缺点；酶容易失活 * 2、共价交联法 通过双功能或多功能试剂，在酶分子间或酶分子和微生物细胞间形成共价键的连接方法。这些具有两种相同或不同功能基团的试剂叫做交联剂。常见的交联