CTAB大量植物基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书.doc

◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外CTAB大量植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号：目录编号 包装单位 10次 适用范围： 适用于快速提取植物基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 次 裂解液PL 室温 ml 结合液室温 mlx2 第一次使用前按说明加指定量乙醇 抑制物去除液IR 室温 ml 漂洗液WB 室温 mlx2第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温 吸附柱AC 室温 收集管（ml） 室温 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 裂解液PL、结合液P或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 产品介绍： 改进的经典CTAB植物DNA抽提液内（添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点： 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 所有的离心步骤均在室温完成， 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。 需要自备氯仿/异戊醇（体积比24：1混合）、无水乙醇和β-巯基乙醇。 结合液P 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示： 第一次使用前请先在漂洗液WB中加入无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 裂解液PL放置在65℃预热，使用前加入β-巯基乙醇到终浓度2%。 取适量植物组织（新鲜组织1 或干重组织3-0.4克）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。 转移细粉到一个5ml离心管，不要解冻，加 65℃预热的裂解液PL (确认已加入β-巯基乙醇至2%)，剧烈涡旋振荡混匀，用大口径枪头吹打帮助裂解。 如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。 65℃水浴0-60分钟，在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。μl RNA酶（20mg/ml）。 注：如果提取的DNA残留RNA较多导致电泳时候条带拖尾，条带扭曲，背景很高等不正常电泳情况，可以加1% RNA酶（10mg/ml）37℃或者室温放置半小时即可消化RNA，消化完后不需要特殊处理便可用于PCR或者酶切。 加入氯仿/异戊醇（体积比24：1混合），颠倒充分混匀几分钟，离心分钟。 若提取的植物组织富含多糖多酚，可以在第4步前用等体积酚/氯仿（1：1）抽提一遍。 小心吸取上清到一个新的5ml离心管，注意不要吸到界面物质。 如上清比较浑浊，则需要重复步骤4一遍，直到得到透亮上清。 （请先检查是否已加入无水乙醇!）刻涡旋，充分混匀。 将上一步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）静置2分钟，离心2分钟，倒掉收集管中的废液（加离心，弃废液，再加入剩余的溶液，再次离心）。 加入抑制物去除液IR，离心2分钟，弃废液。 加入漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），离心分钟，弃掉废液。 。 将吸附柱AC放回