动物细胞膜的分离纯化及其在病毒受体研究中的应用_cropped.doc

 Ξ 动物细胞膜的分离纯化及其在病毒受体研究中的应用 王向东1 ,2 2 ΞΞ战文斌1 黄 ( 1中国海洋大学水产学院 ,青岛 266003 ; 2中国水产科学研究院黄海水产研究所 ,青岛 266071) 摘 要 : 细胞膜是动物细胞与胞外环境之间的屏障 。病毒只有与细胞膜上的病毒受体特异性结合 ,才能进 入细胞 ,进而启动其增殖周期 。因此 ,病毒受体是病毒学研究的重要组成部分 。分离纯化病毒受体所在的细胞膜 作为病毒受体研究的实验材料 ,已经在许多病毒的研究中得到应用 ,并取得了很好的效果 。现就动物细胞膜的分 离纯化及其在病毒受体研究中的应用作一综述 。 关键词 : 病毒 受体 细胞膜 细胞膜微囊 Purif ied Animal Plasma Membranes Applied in Study of Virus Receptor Wang Xiangdong1 , 2 Huang J ie2 ΞΞ Zhan Wenbin1 ( 1 College of Fisheries , Ocean University of China , Qingdao 266003 ; 2 Yellow Sea Fisheries Research Institute , Qingdao 266071) Abstract : Animal cells are bounded by plasma membranes . As a f irst step in virus infection , viruses attach to specif ic receptors on the plasma membranes of cells ; Cellular receptors play an important role in virus pathogenesis . To study the receptors on the cells plasma membranes , plasma membranes vesicles were purif ied f rom susceptible cells . It was proved that the purif ied plasma membranes were usef ul tool f or receptor and virus studies . The method of preparation of plasma membranes and the applications of plasma mem2 branes were reviewed in this article Key words : Virus Receptor Cell membrane Cell membrane vesicles 细胞与细胞外部环境的物质交换 、能量交换和 信号传递都是通过细胞膜完成的 。细胞膜 ( 本文专 指细胞质膜) 的分离纯化在上世纪 70 年代研究的比 较多 , 许多学者采用不同的方法成功地将细胞膜分 离纯化出来 。常用的分离纯化方法是通过物理或者 化学的方法使细胞膜破裂 , 然后分别除去细胞内含 物 , 从而得到纯化的细胞膜[1 , 2 ] 。 病毒侵染细胞首先要与细胞膜上的病毒受体发 生特异性的结合才能启动其增殖周期 。鉴于这一 点 , 许多学者分离纯化细胞膜作为实验材料 , 研究病 毒与细胞膜的相互作用[1 , 3 , 4 ] , 实验证明 : 分离纯化 出的离体的细胞膜在许多与病毒有关的实验中可以 取代活体细胞 , 甚至优于活体细胞 。 1 细胞膜的分离纯化 1. 1 细胞的破碎方法 分离细胞膜的第一步需要将细胞破碎 。不同生 物体或同一生物体的不同组织 , 其细胞破碎难易程 度不一 , 破碎方法也不完全相同 。动物组织细胞常 用匀浆的方法破碎 , 其中匀浆方法包括旋刀式匀浆 手动式匀浆和高压匀浆 。培养的动物细胞常用超 声 、低渗裂解[5 ] 、冻融裂解 、去垢剂渗透和有机溶剂 渗透等方法破碎 。 细胞破碎时会释放各种蛋白水解酶 , 导致蛋白 质的降解 , 因此细胞膜的整个提取过程应该在低温 下进行 , 并加入相应的蛋白酶抑制剂和二价金属离 子熬合剂 。具体选择用哪几种蛋白酶抑制剂则要根 Ξ 国家重点基础研究发展规划项目课题 ( G1999012002) 资助 作者简介 :王向东 ( 1979 2) , 男 , 中国海洋大学在读硕士研究生 , 从事病毒分子生物学研究 ΞΞ 通讯作者 :黄 (1965 2) , 男 , 研究员 , 博士生导师 ,