研究生课件 第四讲 启动子.pptVIP

第四讲 控制植物基因表达的启动子 植物生物技术 植物基因表达: 在启动子和其它调节因子（如转录因子、增强子）作用下，RNA聚合酶II将功能基因转录成mRNA， mRNA再并进一步翻译成蛋白质的过程。 在植物基因工程中，我们要构建基因表达盒(gene expression cassette)，表达盒的结构为： 第二节 启动子的结构　 启动子：位于结构基因5’端上游、能够指导RNA聚合酶同模板正确结合、启动基因转录的一段DNA序列。 ③增强子要有启动子才能发挥作用。没有启动子存在，增强子单独不能表现活性。 ④增强子对启动子没有严格的专一性。同一增强子可以影响不同类型启动子的转录。例如当含有增强子的病毒基因组整合入宿主细胞基因组时，能够增强整合区附近宿主某些基因的转录；当增强子随某些染色体段落移位时，也能提高移到的新位置周围基因的转录。 4. 静止子(silencer) 最早在酵母中发现，以后在T淋巴细胞的T抗原受体基因的转录和重排中证实这种负调控顺式元件的存在。目前对这种在基因转录降低或关闭中起作用的序列研究还不多，但从已有的例子看到：静止子的作用可不受序列方向的影响，也能远距离发挥作用，并可对异源基因的表达起作用。 一、组成型启动子 可以在所有细胞、组织和器官中持续发挥作用的启动子。如看家基因的启动子。组成型启动子用来控制基因的持续表达，如抗病、抗虫、抗不良环境的基因。 在植物基因工程中，用于控制基因组成型表达的启动子主要有2个来源：微生物和植物。 1. 病毒来源的组成型启动子—CaMV35S 启动子 CaMV 35S 启动子是花椰菜花叶病毒（cauliflower mosaic virus，CaMV) 双链DNA病毒基因组中启动35S RNA基因转录的启动子， CaMV 35S promoter，它可以利用宿主细胞核 RNA 聚合酶进行基因转录，并且不依赖于病毒的产物。 35S启动子的结构 CaMV 35S 启动子是一个组成型启动子，不仅可以能在双子叶植物中高效启动基因表达，而且在许多单子叶植物中也可以高效启动基因表达。另外 CaMV 35S 启动子内部没有我们常用的酶切位点，因而容易克隆和使用，在植物基因工程中得到了广泛的应用。 由于CaMV 35S 启动子在植物中成功的应用，人们也克隆了其它病毒的启动子，如cassava（木薯） vein mosaic virus (CsVMV) promoter ， Australian banana streak virus (BSV) promoters，mirabilis mosaic virus (MMV) promoter and figwort（玄参）mosaic virus (FMV) promoter，这些启动子也能够在植物中高效高效启动基因的转录。 利用病毒来源的启动子进行植物转基因有令人担心的问题，如： 转基因食物与感染人类的病毒存在时，启动子可能与病毒基因重组、导致病毒基因的大量表达。 植物细胞可能不识别病毒来源的启动子序列，把它当作外源DNA，对它进行修饰、使它失去作用，导致基因沉默。 2. 植物来源的组成型启动子 在植物中有很多看家基因，在各种类型细胞和所有时间内都表达。启动这些基因表达的启动子就是组成型启动子。现在许多这类启动子已经被克隆，并在植物基因工程得到了应用。 肌动蛋白（actin）是细胞基本骨架的成分，actin基因家族的基因都是组成型基因，其启动子就是组成型启动子。通过检测报告基因的表达，发现1.5kb的拟南芥actin2基因启动子几乎在拟南芥所有器官和整个发育过程中都起作用，仅在种皮、胚轴、子房和花粉囊中不起明显作用。 水稻的actin1基因启动子仅不在木质部中起作用。 Ubiquitin（泛素蛋白）也是细胞中重要的基本成分，参与了许多重要生命过程，如蛋白质转运、染色质结构、DNA修复等。来自玉米的Ubiquitin1基因的启动子（pUbi）是用得比较多的植物启动子之一，特别是在单子叶植物中，在玉米中pUbi的作用是35S启动子的10倍。 来自烟草的Ubi.U4基因的启动子(-263bp)在烟草中的作用比35S启动子好。 二、特异启动子 在基因工程中利用组成型启动子高表达基因常常带来许多麻烦，如影响植物的正常生长发育，转基因植物安全性等问题，所以我们希望在时空上能够控制基因的表达，因此就要用细胞、组织、器官特异启动子。 1. 组织特异启动子（tissue-specific promoter） 就是只在特定的组织或者器官（根、叶片、子房、花粉、花原基、种皮等）中起作用的启动子。 2.果实特异性启动子