基于核酸适体与互补核酸和目标蛋白之间竞争反应的PDGF蛋白特异性识别.pdfVIP

V0l_32 高等 学校 化 学 学报 No．11 2011年 11月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 2509～2514 基于核酸适体与互补核酸和 目标蛋白之间 竞争反应的PDGF蛋 白特异性识别 郑 静 ，秦佳华 ，龚 晨 ，黄 焕 ，何品刚 ，方禹之 (1．上海工程技术大学化学化工学院，上海201620；2．华东师范大学化学系，上海 200062) 摘要 报道了一种利用核酸适体与互补核酸和 目标蛋白之间的竞争反应用于PDGF蛋白的特异性识别方法． 采用反相微乳液技术制备了包覆有亚甲基蓝(MB)的SiO：纳米复合物(SiO一MB)，利用固定在磁性纳米颗粒 上的核酸适体与SiO：一MB纳米颗粒标记的互补核酸进行杂交反应，将一定数量的SiO．MB纳米颗粒固定于 磁性纳米颗粒的表面，引入PDGF目标蛋白后，利用核酸适体与互补核酸和PDGF之间的竞争反应 ，通过检 测MB电化学信号的变化来检测PDGF．该方法对 PDGF蛋白具有很高的特异性识别能力，不受其它蛋白质 如免疫球蛋白G、凝血酶和溶菌酶等的干扰．实验结果表明，PDGF浓度在 5．51×10 一一1．01×10 moL／L 范围内具有 良好的线性关系，检出限可达 1．31×10 moL／L． 关键词 核酸适体；PDGF蛋白；特异性识别 中图分类号 0657．1 文献标识码 A 文章编号 0251—0790(2011)11—2509-06 随着人类基因组计划 (HGP)的顺利完成及蛋白质组学研究的启动，人类进入了后基因组时代，对 特定疾病标志蛋白的检测 日益受到重视 ¨J．血小板源生长因子(Platelet—derivedgrowthfactor，PDGF) 是具有双链结构的蛋白多肽，是血小板分泌的主要丝裂原，在血凝过程中被释放出来，随血液循环而 行进并作用于间充质细胞 J．它能刺激成纤维细胞、平滑肌细胞及神经胶质细胞等细胞的DNA合成 和细胞的增殖，是这些细胞体外培养的重要有丝分裂原，在创伤愈合、组织修复及动脉粥样硬化的形 成中起主要作用 ’；还能诱导成纤维细胞分泌基质成分和生长因子，如IGF-I，HGF和ET3等，这些 生长因子能调节肿瘤生长和肿瘤微环境 J，因此对PDGF进行检测具有重要意义．目前，一般采用酶 联免疫吸附法检测PDGF ’mJ，而基于免疫分析的方法具有抗体对外界温度敏感，活性保存期有限且 固定时活性易受损等缺点．近年来，核酸适体(Aptamer)技术已成为一种新型的蛋白质识别技术 ¨ ， 基于核酸适体识别 PDGF蛋白的生物传感器和相应的诊断技术备受关注 ¨】j，已有利用荧光检测 法 ¨ ”和电化学方法 ¨ 等对PDGF进行检测的报道． 纳米材料的优异性能为超灵敏分析检测带来了新的契机 ．磁性纳米颗粒在生物检测和药物 分析上具有很大的应用潜力 ，利用磁性纳米颗粒 良好的生物相容性和顺磁性来分离和富集样品， 可极大提高生物传感器的灵敏度 ．二氧化硅以其 良好的生物相容性、多孔性、无毒性、化学惰 性、生物降解性及热稳定性，引起了人们的广泛关注 如J．亚甲基蓝(MB)是一种有机染料，具有很 好的电化学响应．掺杂 MB的SiO 纳米颗粒不仅具有 良好的生物相容性，而且MB分子(核)包埋于纳 米 SiO颗粒(壳)的三维网状结构中，有效地防止了MB的流失，提高了电化学检测的灵敏度． 本文报道一种利用磁性纳米颗粒和掺杂MB的SiO：纳米颗粒，将基于竞争反应的核酸适体技术用 于PDGF蛋 白的检测，原理如Scheme1所示．将核酸适体固定在磁性纳米颗粒上，在互补核酸上标记 SiO．MB作为信标 ，在无PDGF蛋白存在时，核酸适体与互补核酸杂交，将SiO一MB带到磁性纳米颗粒 的表面；引人 目标蛋白后，核酸适体处于与互补核酸杂交和PDGF蛋白特异性结合的竞争平衡反应中， 而核酸适体更倾向于与PDGF结合 ，通过检测MB电化学信号的变化来检测 目标蛋白．磁性纳米颗 收稿 日期：2010．12-06． 基金项 目：国家 自然科学基金 (批准号和上海市教委科研创新项 目(批准号：