RNAi ；Molecular mechanism of RNAi；Mechanism of DNA methylation by RNAi inducing等.ppt

Outline of this talking Introducing of gene silence History and definition of RNA Molecular mechanism of RNAi Main components of RNAi Biological Function of RNAi Mechanism of DNA methylation by RNAi inducing Example Translation regulation by RNAi Unanswered question Application Regulate Gene expression level DNA (pre-transcription ) gene amplification Transcriptional level (promoter, TF. Enhancer Reducer ) Post Transcriptional Level (mRNA ,tRNA and rRNA maturation Spicing Exton, Cap and polyA, RNAi) Translational and post translational level Promoters silenced Genes hypermethylated in promoter region Purpose - Viral immunity? (Plant） 在1990年，Napoli等试图用转基因技术使有色矮牵牛花(petunias)的花朵更加艳丽，他们将色素合成相关基因(CHS基因)置于一个强启动子(CaMV35S)之下，转人矮牵牛花，希望通过在该植物花中增加色素基因的拷贝数，使该植物开出更艳丽的花朵。然而，实验结果则与预期相反：不少花朵的颜色减退，有的甚至变成了白色花朵。接下来的深入研究证明，被转入该植物花中的外源色素基因的表达被抑制，转基因植物本身的同源色素基因的表达也受到抑制，这种外源基因和本身的同源基因均受到抑制的现象被称做共抑制(CO—suppression)，但当时该现象的本质不明? 。 1994年，当Cogoni和其同事以真菌脉孢霉(Neurospora)为实验材料把外源基因转人该菌时，该菌本身的基因表达也受到抑制，当时把这种在真菌中发现的类似现象称为基因消除(quelling)，但当时仍未明确其机制。 线虫 C. elegans 1995年，美国康乃尔大学的Su Guo在以线虫(Caenorhabditis elegans)为实验材料，试图用反义RNA技术阻断线虫par—l基因的表达以探索该基因的功能时发现：当向线虫的胚细胞中注入与该基因mRMA互补的反义RNA时，该基因的表达如预期的那样被阻断。但是在注人与该基因mRMA相同的正义RNA的对照组中，该基因的表达也同样被阻断，这一现象无法用传统的反义RNA技术的机制来解释。 RNAi in other organism 研究人员又在果蝇(Drosophila)、涡虫(Planaria)、椎虫(Trypanosomes)、无脊椎动物、脊椎动物、哺乳动物(由短于30 bp的dsRNA诱发RNAi )、植物等许多真核生物中发现了RNAi作用。经几年研究，研究者们已认识到：RNAi是在动、植物分化以前就已普遍存在的一种古老的生物学现象，是真核生物体抵抗外源基因(如病毒基因、转座子、人工转入基因等)入侵的一种保护性反应，因此又被称为基因组的免疫机制。同时，它还是生物体在不同时期通过调控基因表达来调节细胞分化的机制。 定义 RNA干涉(RNA interference，RNAi)是指双链RNA(double—strand RNA，dsRNA)在细胞内特异性地诱导与之同源互补的mRNA的降解，使相应基因的表达关闭，从而引发基因转录后水平沉默的现象(Post Transcriptional gene silencing，PTGS) 。 与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用，使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用，使相应基因不能被转录，从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能，使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing，TGS)。 在Argonaute蛋白的协助下，Dicer酶识别外源的长的双链RNA分子(dsRNA)，并以一定的间隔将dsRNA切成22个核苷酸大小的小的干涉RNA分子(siRNA)．siRNA随即与效应物RISC(RNA诱导的沉默复合物)结合，在ATP的作用下解旋，从而使RISC由250 kD大小的前体形式变成约100