精选色谱分析概论3.pptVIP

分离机制：依据被测组分与离子交换剂交换能力(亲和力)差别而实现分离。 阴离子交换反应 阳离子交换树脂交换示意图 * (2)固定相和流动相 固定相是离子交换剂 —常见的是离子交换树脂，是具有网状立体结构高分子的聚合物。如苯乙烯和二乙烯苯聚合 ，其中二乙烯苯是交联剂。 交联度(degree of cross linking) —指交联剂在原料中所占总重量的百分比。 理论交换容量(exchange capacity)—每克干树脂能交换离子的毫摩尔数。 粒度—指离子交换树脂颗粒的大小，一般以溶胀态所能通过的筛孔来表示。 流动相: 水、缓冲溶液、或加入少量的乙醇、四氢呋喃、乙腈等有机溶剂，提高选择性。 * (3)影响保留行为的因素 溶质离子的电荷和水合半径： 价态高，K 大； 同价离子，水合离子半径增大，K小。 常见阳离子在交换树脂上的交换顺序是： Fe3+A13+Ba2+≥pb2+Sr2+Ca2+Ni2+Cd2+≥ Cu2+≥C02+≥Mg2+≥Zn2+≥Mn2+Ag+Cs+Rb +K+≥NH4+Na+H+Li+ 常见阴离子在交换树脂上的交换顺序通常为： 柠檬酸根P043-S042-I-NO3-SCN-NO2-C1-HCO3 - CH3COO- OH-F- * 离子交换剂的交联度和交换容量：在一定的范围内树脂的交联度越大，交换容量越大，则组分的保留时间越长。 流动相的组成和pH：交换能力强的离子组成的流动相有较强的洗脱能力。强离子交换树脂的交换容量不随流动相的pH变化，调节pH值的主要作用是控制弱电解质离解。 离子交换色谱主要是用来分离离子或可离解的化合物。它不仅广泛地应用于无机离子的分离，而且广泛地应用于有机和生物物质，如氨基酸、核酸、蛋白质等的分离。 * 4. 空间排阻色谱法 要求： 固定相→多孔性凝胶 流动相→水——凝胶过滤色谱 流动相→有机溶剂——凝胶渗透色谱 (1)分离机制： 　　利用被测组分分子大小不同、在固定相凝胶孔径间的上选择性渗透实现分离 图3 凝胶色谱分离示意图 * 排斥理论： 孔内外同等大小的溶质分子处于扩散平衡状态 Xm Xs Kp=[Xs]/[Xm] 渗透系数的大小由溶质分子的线团尺寸及凝胶孔径大小决定。 　分子大到不能进入凝胶所有的空隙：[Xs]=0，Kp=0 　分子小到能进入凝胶所有的空隙：[Xs]=[Xm]，Kp=1 　分子尺寸在上述两种分子之间：0＜Kp＜1 Kp称为渗透系数。 高分子溶液中，Kp与分子量有关。该色谱可用于分子量的测定。 * (2)固定相和流动相 固定相 多孔凝胶 主要性能参数： 平均孔径：凝胶孔径大小。 排斥极限:不能渗透进入凝胶的任何孔隙的某分子量(KP=0)。 分子量范围：排斥极限(KP=0)与全渗透点(KP=1)之间的分子量范围。 选择凝胶时应使试样的分子量落入此范围。 流动相 要选对样品的溶解好，又能润湿凝胶。粘度要低的溶剂，否则，会限制分子扩散而影响分离效果。一般水溶性试样选水溶液，非水溶性试样选四氢呋喃、氯仿、甲苯和二甲基甲酰胺等有机溶剂。 * 结论： 四种色谱的分离机制各不相同，分别形成吸附平衡、分配平衡、离子交换平衡和渗透平衡。 K分别为吸附系数，狭义分配系数，选择性系数和 渗透系数。 除了凝胶色谱法中的K仅与待测分子大小尺寸、凝胶孔径大小有关外，其他三种K值都受组分的性质、流动相的性质、固定相的性质以及柱温的影响。 * 5.亲和色谱 基本原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。 先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。 图4 亲和色谱示意图 * 流出曲线(色谱图)电信号强度随时间变化曲线。 色谱图是以组分的浓度变化作为纵坐标，流出时间作为横坐标的 2.3 色谱流出曲线和有关概念P5 2.3.1色谱流出曲线和色谱峰 图5 色谱流出曲线 * 基线: 指纯流动相进入检测器时的流出曲线. 色谱峰: 突出部分为色谱峰. 图5 色谱流出曲线 峰高: 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离. * 对称因子 正常峰（对称） 非正常峰 前沿峰 拖尾峰 色谱峰 ——fs=0.95~1.05 ——fs0.95 ——fs1.05 图6 对称因子的求算 * 2.3.2 定性参数—保留值 1.保留时间(tR)：