青蛙染色体标本的制备与观察.pptVIP

青蛙染色体标本的制备与观察 一 实验目的：初步掌握动物骨髓染色体标本制备的基本原理和过程.了解常用实验动物染色体的数目及特点. 二 实验原理： 在正常动物体中，骨髓是处于不断分裂的组织之一。给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞与中期。 取出的骨髓细胞要经过低渗（kcl溶液）使细胞膨胀、染色体适当的分散。固定（甲醇、冰醋酸）使染色体保持完好的形态。染色（giemsa液）使染色体易分辨、观察。制备优良的标本可获得满意的观察效果。利用动物骨髓制作染色体观察标本取材容易，不需培养，不需无菌操作，比较简便，是生物学实验教学中常用的方法。一般选用的动物有青蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠等。 三、实验步骤： 1 按体重的剂量经腹腔注射秋水仙素(浓度250ug/ml)，0.5ml/30g,4-5小时后处死青蛙； 2 取出青蛙后肢的胫骨和股骨，剥离全部肌肉，剪去两端； 3 将约5mL生理盐水用注射器分次缓慢注入骨髓腔，将细胞冲入小烧杯内（反复冲洗，以获得更多的骨髓细胞），摘掉针头，用注射器筒轻轻吸打，使之分散成单个细胞； 4 将骨髓细胞转入离心管，平衡后离心，以1000r/min离心8min； 5 去上清液，加入0.075mol/L KCl溶液5mL，用吸管将细胞吸打均匀，低渗20min ，平衡后离心（离心条件同上）； 6 去上清液，沿管壁缓慢进入加入卡诺固定液（甲醇：冰乙酸）5mL，用吸管将细胞吸打均匀，固定30min ，平衡后离心（离心条件同上）； 7 离心完成后，吸去上清液，视管底细胞多寡加入少量新配制固定液，将细胞轻轻吸打成细胞悬液 8 在干净、湿、冷的载玻片上滴2-3滴细胞悬液，酒精灯上文火烤干； 9 染色，用Giemsa染液扣染10 min-15 min； 10 在自然水管下细流冲洗数秒，搽干玻片底面和四周，显微镜观察 实验成败关键： 收集足够多的骨髓细胞 在每一次离心过程中尽量不要丢失细胞 低渗，固定过程中要轻轻摇动，保正细胞受到均匀处理 滴片后要烤干后才能扣染，扣染后要小心冲洗，不能用太大的水流 四、实验作业： 1 绘制青蛙染色体图并计数。 2 你制备的青蛙染色体标本，分裂相是否多，染色体分散程度如何？有什么不足，原因何在？ 3 简述秋水仙素的作用原理？秋水仙素处理的时间以及浓度会对实验造成怎样的影响？ 4 制片过程中为什么要进行低渗处理？低渗的时间长短对染色体制片效果有何影响？ * * 几种动物染色体形态特征 近端着丝粒染色体，介于19～20号 亚中央着丝粒染色体，介于5～6号 中央、亚中央近端着丝粒染色体 44 家兔 近端着丝粒染色体，介于18～19号 近端着丝粒染色体，介于4～5号 中央、亚中央近端着丝粒染色体 42 大白鼠 大小介于19～20号 大小介于5～6号 全部为近端着丝粒染色体 40 小白鼠 中央着丝粒染色体，介于8～9号 中央着丝粒染色体，介于6～7号 中央、亚中央着丝粒染色体 26 青蛙 y染色体形态 x染色体形态 染色体类型 染色体数 动物名称 预备实验结果 *