精选色谱柱培训.pptVIP

解决有关重现性不好问题，通常有以下几点： 在整个应用中都采用同一固定相、粒度和柱尺寸 选择良好的流动相，尽量减小硅羟基效应 确保流动相充分平衡色谱柱 * 谱峰拖尾 当出现拖尾峰时，估算柱塔板数与分离度是将偏高 对于不对称因子为1.2的峰（峰拖尾因子约为1.5），用半高峰宽方法计算使塔板数偏高30%，计算分离度的误差高达15%！ 如果用中性化合物测试新柱，如显示峰严重不对称，不可用于方法建立！ * * 拖尾峰常见于使用过度的色谱柱—柱口赃物或塌陷，部分堵塞进口滤板 填补柱塌陷对价值较高的色谱柱最实用（手性柱、制备柱） 在建立常规分析方法时，用保护柱可以减小强保留样品组分积聚可能性的有效方法 注入的样品溶剂强度大于流动相时，往往会造成早流的色谱峰变形和拖尾 * 实例 * 并非适用于所有的情况，例如阿奇霉素肠溶干混 对于难溶性的物质，可以先用强溶剂溶解后，再同流动相稀释 * 与HPLC设备有关的柱外效应可以引起峰拖尾与色谱峰变宽： 进样体积过大 进样阀、色谱柱及检测器之间的管线体积过大 检测器流动池体积过大 * 实例 * 建议： 进样体积要小（一般＜25uL） 进样阀与色谱柱，色谱柱与检测器之间用细内径的短连接管线（例如，＜20cm,内径为0.07cm） 确保所有管线用匹配的接头正确连接 使用易清洗、体积小的检测器流通池（＜8uL） * 色谱柱寿命 色谱柱失效的原因： 进口滤片或柱床