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血吸虫雌虫发育调节基因的研究现状与展望 国外医学寄生虫病分册 /l7一f7岁血吸虫雌虫发育调节基因的研究现状与展望 中山医科大学寄生虫学教研室周俊梅综述余新炳审校 劳 ;;州 摘要虫卵是血吸虫病致病和传播的首要因素,因此,虫卵及雌虫生殖系统的发育成为对血吸虫病 进行药物攻击和/或疫苗研制的潜在靶.血吸虫发育体系的特殊性表现在雌虫的性成熟依赖于与雄虫 的台拖.从丹子水平上看,雌虫一些基因的表达受雄虫的调控,这些基因统行为发育调节基因本文就已 知的几个血暇虫雌虫发育调节基因的研究现状与展望作一综述.1栩 关键词兰蔓堡!苎—哥才.-————一———,———一’…’’l一 血吸虫病致病和传播的首要因素是虫(femalespecific)或雌虫优先的(female 卵,即无论从临床还是从流行病学的角度看,preferentia1),它具有以下特性:1)高水平表 该病的发生都有赖于虫卵的产生和传播.与达;2)在雌虫表达,雄虫不表达(或在雌虫高 此相关的是,血吸虫有一特殊的发育体系,即丰度表达远远超过雄虫);3)在成熟雌虫表 雄虫控制和调节雌虫一些基因的表达,但是达,未成熟雌虫不表达. 现在对其机制还不十分清楚.已观察到,无论 单性感染或复性感染,雄虫都能完成形态发 育,不过仍存在行为,生理和抗原性的差 异J.然而,单性感染的雌虫却发育不全, 生长迟缓,生殖系统不成熟.虽然卵巢,卵膜 和子宫能在未成熟雌虫体内发育,但是卵黄 腺却不能发育].雄虫对雌虫的这种发育 刺激作用具有独立性,即不依赖精子传递及 受精,也没有种的特异性.卵黄腺的发育只在 雌雄虫合抱时才发生,并且雌虫接触任何雄 虫片段都能刺激其自身的发育]. 由于虫卵在病理方面的轴心作用,所以 在疾病控制方面,对血吸虫性成熟的理解至 关重要.除了最近在分离可能诱导保护性免 疫的抗原方面取得了一些有前景的进展,要 生产人用疫苗还不能肯定.因而抑制产卵和 阻止性成熟代表了防治血吸虫病及减少与疾 病相关的病理变化的首要选择,虫卵”及雌 虫生殖系统的发育已成为药物攻击和/或疫 苗发展的潜在靶点.因此,在分子水平上控制 雌虫性成熟及产卵,并且分离与这种控制相 关的基因,不仅是对高度复杂进化的生物系 统的深入观察,而且也是为与不断变化发展 的疾病作斗争寻找新的方法]. 本文就现已知的几个血吸虫发育调节基 因作一综述.这种基因的表达是雌虫特异的 1卵黄腺表达的发育调节基因 与脊椎动物的发育不同.血吸虫的产卵 是一个复杂的过程,它需要两种不同的细胞 …一 卵细胞和卵黄细胞,后者提供卵壳形成 的材料以及内胚层发育所需的营养素.另外, 由于成熟雌虫的产卵是持续的,所以完全可 推测它们的mRNA总体中占很高水平的 RNA应该只与有限的几个基因相关,这些基 因编码虫卵主要蛋白成分的前体] 曼氏血吸虫有3种雌虫特异基因与卵黄 细胞相关,它们是P14卵壳前体蛋白基因, p48卵壳前体蛋白基因和fs800基因.新近还 发现铁蛋白基因也在卵黄腺表达. 1.1p14 每条曼氏血吸虫雌虫日产卵约300,为 此每天需产生11000个成熟的卵黄细胞,提 示卵黄腺的代谢是非常活跃的’l5】事实上, 与雄虫台抱的雌虫出现卵黄细胞分化是生殖 系统成熟的最早标志,在分子水平上给雌虫 的成熟过程定性的重要一步是分离和克隆那 些高水平存在于成熟过程及性别特异表达的 基因,对发育的分析也就转移到分析这些基 因的转录水平上. 现已用差异杂交法筛选曼氏血吸虫成虫 cDNA文库,分离副几个雌虫高效表达基因 的相关克隆其中pSMF叭一46的mRNA长 约950hp来源于成熟雌虫独有的发育调节 基雕,即P14的编码基因除r成熟雌虫,在 单性感染的雌虫,雄虫或虫印都未检出.此 外,基因的表达还侬籁于雌雄台抱的时间:正 常复性感染时,于感染后28天首次检测到 (正好是雌雄合抱时问),感染后35天达到高 峰f与产卵的时间一致).核酸序列分析显示 pSMF61-46有两个不寻常的特点一是存在 一 个几乎完整的含47个核苷酸的串联重复 区(只有一个错配);二是编码链上有两个大 的开放阅读框架(ORF1和ORF2),其中 ORF1编码约16kDa的多肽,与丝蛾虫的卵 壳蛋白有高度同源性,纯化的卵壳蛋白含甘 氨酸44,酪氨酸¨.重复的核酸序列包 含在两个阅读框架内,几个小的重复单元特 别是在ORF1的富甘氨酸重复单元,与丝蛾 虫缄膜(卵壳)蛋白极为相似】. Koster等构建了重组质粒,表达由 pSMF61—46的ORF1编码的融台蛋白,进一 步证实ORFl为卵壳蛋白基因.抗雌虫匀浆 的抗血清识别该融合蛋白.Western印迹分 析显示,与融合蛋白反应的亲和纯化抗体只 识别来自雌虫的蛋白一～28kBa的多肽免 疫组化分析显示亲和纯化的抗体与雌虫成熟 卵黄细胞反应.