泰山螭霖鱼原始生殖细胞PGCs起源、迁移及性腺分化规律的研讨.pdf

扩增、遗传、选择、克隆、冷冻保存而不失其多能性。在悬浮培养条件下，它可形成类胚 体，像早期胚胎那样发生有秩序的分化。 与Es细胞相比，EG细胞的培养材料相对较易获得。PGCs数量相对较大。如此庞大 数量的PGCs，在多能干细胞培养中得以应用丽取代早期胚胎，就能很大程度上解决材料 来源短缺问题，而且可免去为了获得多个附植前胚胎而对畜体进行的超排处理。 本论文对影响小鼠早期原始生殖嵴细胞(PGCs)分离、培养、传代的因素进行了探索。 先后共采集89枚CD-I小鼠不同发育期胚胎，通过原始生殖嵴细胞(PGCs)体外分离、 培养、传代的影响因素对比试验，研究表明：处于10．5dpc发育期的小鼠胚胎生殖嵴中分 离PGCs长期培养的成功率要高于8．5 dpc(p0．05=，差异显著；以高糖DMEM(含丙 ul B一巯基 原始生殖嵴细胞体外分离、培养、传代要好于同～培养液以MEF细胞为饲养层‘pO．01)； 在相同条件下一次离散法和连续离散法无显著差异(p0．05)；培养液中同时添加bFGF、 细胞的生长增殖起较大作用。 关键词：小鼠原始胎儿生殖嵴细胞 基金项目；本研究项目由：国家自然科学基金重大项目(190：339993420)：科技部“863”项目 ‘通讯作者 0如：2003AA205fooj共同资动 泰山螭霖鱼原始生殖细胞(PGOs)起源、迁移 及性腺分化规律的研究 宋卉王树迎’ (山东农业大学动物科技学院山东泰安271018) GermCells， 摘 要： 本文通过光键，电镜及PAS法对泰山蝻霖童原始生殖蛔胞(Primordial PC42s)的发生、迁移及性朦分化规律进行了研究．蛄果表明：PGCs最早出现干原肺早期； 6日龄，生殖嵴形成；随后，PGCs沿脏壁中胚屡迁移到两侧的生殖嵴中，与生殖嵴共同组成 来分化性腺(原始性腺)．60日龄，原始性朦向卵巢分化；70日龄精巢分化开始·泰山螭霖 鱼PGCs巽有鱼类pGCs的共同特点，电镜下观察到其胞雇中有生殖质存在·PAS反盛阳性· 关键词： 泰山墒霖鱼原始生殖细胞原始性腺性朦分化 ．193． Germ 原始生殖细胞(Primordial Cells，PGCs)参与生殖腺的形成，揭露性别的分 化机制。对原始生殖细胞起源、迁移和性腺分化方面的研究，国内外学者已进行了大量工 作，但鱼类有关此方面的研究则不多“’“5’‘“”1，意见也不统一。泰山螭霖鱼(Varicorhi月Ⅱs macrolepis)是生活在泰山海拔270～800米山涧水溪中的一种珍贵的小型鱼种，属鲤科， 鲅亚科，与富春江的鲥鱼、青海湖的湟鱼、渤海的弓鱼和油鱼，并称为我国的五大名鱼。 以其肉质细嫩，味美不腥、营养丰富及独特的药用保健价值而闻名于世。目前，泰山螭霖 鱼的人工驯养和繁殖已取得了成功。通过对其W,Cs的研究可以为人为地控制鱼类性别提 供理论依据，在渔业生产中有重要的实践意义。 1材料与方法 泰山螭霖鱼试验用鱼取自山东农业大学螭霖鱼研究中心。于产卵期(每年的4—6月) 用人【：受精的方法获取受精卵，池水温度为18～25‘C之间。按胚胎发育的时序，出膜前 各期每次20粒；出膜l～10日龄，每天取鱼lO尾；11～20目龄，隔天取鱼，每次10尾： 20～60日龄，每周取鱼一次；60～90日龄，每10天取鱼一次：90～130日龄，每两周取 鱼一次。自20日龄的仔鱼开始，去头、尾，留躯干段，每次10尾。以上材料均用Bouin 氏液固定，常规石蜡包埋，连续切片，厚度约为5～7pm，H．E．染色，OLYMPUS显微镜 观察、测量并拍照。随机测量出膜后仔鱼的全长。取平均值。电镜观察材料：将原肠晚 期的胚胎常规方法脱水包埋，半薄切片定位。超薄切片，醋酸铀一柠檬酸铅双重染色，