中国南海海绵提取物renierol抗痛风的实验研讨.pdfVIP

疆毽I仃’ 第三届海洋生物膏技术论坛 2005．08．19-23 中国南海海绵提取物renierol抗痛风的实验研究 尚雁君1郭跃伟2黄才国’贾睿2许强芝1魏善建1焦炳华 第二军医大学基础医学部生物化学及分子生物学教研室，上海200433； 2．中科院上海药物所，上海201203) 摘要：目的探讨中国南海海绵提取物renierol对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及对小鼠高尿酸血 症的影响和可能的作用机理。方法从海绵中分离提取renierol成分，采用尿酸生成法和超氧 离子致NBT显色法测定黄嘌呤氧化酶活性，并进一步研究其作用机理。结果：两种实验显 renierol成分能有效抑制黄嘌呤氧化酶的作用。 关键词：海绵；renierol；黄嘌呤氧化酶；超氧离子；痛风 痛风是一种与生活密切相关的代谢性疾病，是长期嘌呤代谢障碍，尿酸增高引起组织损 伤的一种临床综合症，临床上可见高尿酸症，特征性关节炎反复发作，严重者可致关节行为 障碍、畸形、肾尿酸结石及痫风性肾实质病型1I。目前西医治疗痛风的药物主要集中在以下 两个方面：1．降尿酸药包括促尿酸排泄药和尿酸生成抑制剂，临床在唯一使用的尿酸生成剂 是黄嘌呤氧化酶的竞争性抑制剂别嘌呤醇。2．抗炎药包括秋水{IIi碱，非甾体抗炎药和肾上腺 皮质激素等。痈风急性发作，土要使用抗炎药，慢性期主要应用别嘌呤醇，但长期应用别嘌 呤醇会造成严重的变态反应，肝毒性等不良反应，国内外科研工作者一直在寻找能替代别嘌 岭醇的药物，但到目前为n：仍未找到理想的药物。本文主要研究中国南海海绵中提取的化合 物renierol对黄嘌呤氧化酶的抑制作用和体内降尿酸作用【2J。 1材料和方法 1．1药物和试剂 Xanthine(黄1嘌呤)购白美国Sigma公司； Allopurinol(别嘌呤醇)购白美国Sigma公司； NitroBlue Btetrazolium(P_q唑硝基氮蓝)购白美国Sigma公司： Xanthine Oxidase(黄嘌呤氧化酶)购白Roche公司； Sodium Ace Biomedical公司。 DecahydrateReagent(焦磷酸钠盐)购自ICN Pyrophosphate 1．2 renierol的分离纯化方法：我国南海海绵，丙酮提取，提取液减压浓缩至无有机溶剂， 得浸膏，用水溶解粗浸膏，然后用乙醚萃取数次，合并乙醚萃取液减压浓缩得到乙醚浸膏， 该浸膏经硅胶柱层析，石油醚／乙醚梯度沈脱，石汕醚／乙醚1：1洗脱部分经凝胶LH一20柱(石 油醚／氯仿／甲醇2：1．1洗脱)，得到纯化合物renierol。 43 疆毽l门 第三届海洋生物膏技术论坛 2005．08．19．23 1．3 renierol对黄嘌呤氧化酶活性的影响 1．3．1利用尿酸生成法测定黄嘌呤氧化酶活性 1．t lmM黄嘌呤溶液中加入不同浓度的样品或阳性对照别嘌呤醇(10 g．ml-1)，加入 尿酸生成量，以5min的尿酸生成量作为反应速度。 1．3．2利用超氧离子致NBT显色测定黄1嗓呤氧化酶活性 1．t u U．ml-1)、NBT(50M)、不同浓度 反应体系中黄嘌呤(50M)、黄嘌呤氧化酶(O．01 la 的样品或阳性对照别嘌呤醇(1g．ml一1)，反应体系中加入磷酸盐缓冲液(50mM、pH值7．2) la 至终体积600L。