注射L精氨酸和环磷酰胺对杂色鲍血清中NONOS的影响研究.pdf

福建畏仃。 第三届海洋生物育技术论坛 200s．08．19．23 注射L．精氨酸和环磷酰胺对杂色鲍血清中NO／NOS的影响+ 王广军，谢骏，余德光术 (中国水产科学研究院珠江水产研究所，广东广州510380) diversicolor 摘要：为了研究注射L．精氨酸和环磷酰胺对杂色鲍(Haliotis Reeve)血清中一氧 射1次，共注射3次。第16天检测其血清中NO含量以及NOS活力的变化情况。结果表明， L一精氨酸可以显著提高实验鲍血清中NO的含量和NOS的活力，而环磷酰胺则可以显著降低 实验鲍血清中NO的含量和NOS的活力。为今后人为地调控鲍体内的NO含量、增强其自身 的非特异性免疫功能，从而提高抵抗疾病的能力提供了理论依据。 关键词：杂色鲍；一氧化氮；一氧化氮合酶；L-精氨酸；环磷酰胺 杂色鲍(Haliotis 剩11。随着杂色鲍养殖规模的不断扩大，病害的发生也越来越严重，严重影响了其养殖业的 健康、持续发展【2，jJ。 一氧化氮(Nitricoxide，NO)是一种新型生物信使分子，它广泛分布’j二生物体内各组织 oxide 中，其生成依赖于一氧化氮合酶(Nitric 分子、效应分子和免疫调节分子，近年来在免疫领域已经得到不断深入的研究【5习】。国内外关 一J二NO的研究在人类和其他动物较为广泛，在水产方面也有了一定的进剧10】。本实验室通过 生物化学法鉴定了鲍血．细胞中NO活性的存在，并且测定了鲍鱼人工感染副溶血弧菌和自然 发病时血清中N0／NOS的变化情况。本文研究了注射环磷酰胺和L一精氨酸鲍鱼血清中 NO／NOS的变化情况，为进一步探讨人为调控NO／NOS的含量，使之朝着有利于提高机体免 疫能力的方向发展提供理论依据。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1实验用鲍 实验用杂色鲍取自深圳市龙岗Ⅸ南澳鲍鱼场，平均壳长为6．13_+0．81cm，平均壳宽为 暂养10d，按常规方法投喂江蓠饲养，挑选健康、外观无明显病症的个体用于实验。 】．2．1实验药品 +撼金项目：广东省自然科学基会项日(031818) 262 覆毽馥n 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19—23 珠生物技术公司生产，NO及NOS测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 1．2实验方法 1．2．1实验设计 实验鲍蓄养于120L的圆形塑料桶中，有效水体80～100L，每桶放入10只鲍为一组。 L．精氨酸分三个注射浓度，分别按每公斤体重注射250mg(G1)、500mg(G2)和1000mg (G3)。每个浓度设3个重复。每5天注射～次，连续三次。注射方法采用足部注射，注射 剂量控制在为0．1ml／只。在第3次注射后第6天，从腹足中央切开腹足肌，用清洁的2．5mL 一次性注射器吸取血淋巴液，每次每组随机取3只。所取血淋巴液置j二4。C冰箱过夜后， 4000r／min离心5min，吸取上清液标记后放在一20℃冰箱中待测。 环磷酰胺也分别设计三个实验浓度，5 mg／kg(G6)。 mg／kg(G4)、10mg／kg(G5)和20 注射方法和血清处理方法同上。 1．2．2检测指标与方法 NO的测定采用硝酸还原酶法，NOS活性测定采用化学比浊法(按测定试剂盒进行)。 NO为一个酶活力单位。 酶活力单位定义：37。C时每毫升血清每分钟催化生成1nmol 1．3数据分析 数据采用SPSS统计软件进行处理分析，利用方差分析(ANOVA)来检验各组之问的显 著性，并采用Duncan’S法进行多重分析，P0．05为显著性水平。 2结果 2．1不同剂量L．精氨酸对鲍血清中NO含量的影响 注射不J司剂量的L一精氨酸对对杂色鲍血．清中NO的含量有明显的促进作用(见图1)。 间