东亚飞蝗消化系统蛋白质组双向电泳的分析研究.pdfVIP

第 36卷 第6期 江西师范大学学报(自然科学版) 、，o1．36No．6 2012年 11月 JournalofJiangxiNormalUniversityN(aturalScience) NOV．2012 文章编号：1000—5862(2012)06—0569-05 东亚飞蝗消化系统蛋白质组双向电泳的分析 李燕良，邬玉兰，闫 浩，杨芷菁，陈义坤，刘志刚 (深圳大学过敏反应与免疫学研究所，广东 深圳 518060) 摘要：为了优化东亚飞蝗消化系统双向电泳技术，建立东亚飞蝗消化系统蛋白表达图谱，探讨雌、雄东亚飞 蝗消化系统蛋 白组分的差异，利用pH值为 3～1O和pH值为4～7的胶条分别对雌、雄东亚飞蝗消化系统进行 双向电泳分析，进行蛋白组学分析．研究结果发现：雌性东亚飞蝗消化系统蛋白种类多于雄性，雌性东亚飞 蝗消化系统特异蛋 白中偏酸性蛋 白数量与偏碱性蛋 白相 当，而雄性东亚飞蝗消化系统特异蛋 白中酸性蛋 多于碱性蛋 白．在雌 、雄东亚飞蝗消化系统相匹配蛋 白中，含量差异达 3倍以上的蛋白约占总匹配蛋 白的 50％．可见，雌、雄东亚飞蝗消化系统蛋 白组分存在差异． 关键词：东亚飞蝗；消化系统；蛋白组分；双向电泳；差异性分析 中图分类号：Q78 文献标志码：A 涉及昆虫免疫调节、生理发育、昆虫行为活动等重要 0 前言 的生物学问题f们．例如，蔡来来等 【】采用不同方法对小 菜蛾血淋巴进行了双向电泳，建立了一套适用于小菜 功能基因组学包括结构基因组研究和蛋 白质组 蛾血淋巴蛋白质组分析的双向电泳体系． 研究等…，由于基因错综复杂的表达，再加上翻译后 东亚飞蝗 (Locustamigratoriamanilensis(Meyen)) 修饰作用，各蛋 白存在形式及其构象的不同，所以大 是一种对农业危害性极大的害虫，数十年来，人们 多数功能基因组研究仍然建立在蛋 白质水平上． 通过喷洒农药预防蝗灾，导致蝗虫产生抗药性iS]． 蛋白质组学作为功能基因组研究的一个重要平台， 消化道已被国内外学者认定为研究蝗虫抗药性的重 包含双向电泳技术、质谱技术和生物信息学3大核心 要器官，但 国内外的研究大都集 中在蝗虫消化系统 技术．其中双向电泳是最早应用于蛋白质组学的研究 的形态结构上 【l3】．本研究通过对雌、雄2类东亚飞 方法，也是 目前应用最多的研究方法．它以蛋白质的 蝗消化系统进行蛋 白组学分析，优化雌、雄 2类东 等电点和相对分子质量作为独立参数，第一向电泳根 亚飞蝗消化系统蛋白双向电泳技术体系，获得东亚 据蛋白质等电点的不同，对样品进行等点聚集分离 飞蝗消化系统的蛋 白图谱．同时，鉴别雌、雄东亚飞 (IEF)，第二向根据相对分子质量大小的不同，用十二 蝗在环境适应过程中消化道 出现的差异性，为进一 烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶 电泳(SDS．PAGE)进行分 步更好地进行蝗虫防治奠定基础． 离，从而达到分离蛋白的目的，为蛋白质的鉴定提供 技术支持[．蛋白质双向电泳技术可以获得高分辨率 1 材料与方法 的2维图谱，在一块凝胶上可分辨出1800多个蛋白质 点[引．目前，双向电泳技术已广泛应用于生物、医学等 1．1 材料 领域的蛋白质组学研究[4】．小鼠、果蝇和大肠杆菌等 1．1．1 供试昆虫 东亚飞蝗由中国农业科学院植保所 模式生物都已建立了高质量的双向电泳数据库，双向 提供．饲养条件：常温下喂养麦麸和麦苗，光照时 电泳技术在昆虫学研究领域也得到了广泛的应用．目 间小于2h／d． 前国内外已有关于昆虫较为深入的蛋白质组学的研究， 1．1．2 主要试剂 IPG干