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第29卷第5期 水生生物学报 V01．29．No．5 2O05年9月 ACTAHYDROBIOLOGICASINICA Sep．，2005 两种鳜病毒的共感染现象及引起感染细胞的超微变化 张奇亚 陶建军 黄晓红 李正秋 袁秀平 (中国科学院水生生物研究所，淡水生态与生物技术国家重点实验室，武汉430072) 摘要：借助细胞培养和电镜技术，揭示了鳜球形病毒(Jsi嘶，删曲u船isphericalvinls，ScSv)与鳜弹状病毒(S讥咖eM c^—捌rhabdovims，scRv)在草鱼鳍细胞(Gmsscarp6ns，GcF)中共感染的现象。在筛选到敏感鱼类细胞系和建立了 鳜病毒体外增殖系统的基础上，取患典型病毒感染出血症的鳜组织，制备组织悬液，接种到GcF细胞中传代培养， 在攻毒后间隔不同时间收集细胞，对攻毒细胞的超薄切片进行电镜观察。揭示两种形态的鳜病毒可在同一个GCF 细胞中增殖，并描述和分析了病毒复制引起感染细胞的超微病变。本研究结果有助于阐明鱼类重要病毒病害的发 生过程及致病机理。 关键词：鳜病毒；共感染；超微变化 中图分类号：s941．41 文献标识码：A 文章编号：1000．3207(2005)05．0473．06 在人们掌握了水产动物的繁育技术之后，大面 积暴发的水生动物病害就成为制约渔业可持续发展 胞病变。收集鳜病毒感染的细胞液(鳜病毒悬液)，再 的瓶颈。而不同病毒病原共感染，导致水生动物发 接种到正常单层GCF细胞中。如此进行多次传代培 病或死亡，增大疾病防治的困难，加速病害扩散、流 养，使细胞病变出现的时间和状况保持稳定。 行及水环境恶化¨J，给人类生产和生活带来不良影 1．2电镜样品的制备及超微观察在细胞培养瓶 响。因此，探讨由复杂病毒病原引起的水生动物流 中培养5组GCF单层细胞，1组为不接种病毒的对照 行病是一个很有意义的课题。作者起初在患病鳜组 细胞，另外5组分别接种经过多次传代培养、感染性 织中观察到不同形态的病毒颗粒存在怛J，也对鳜球 状稳定的鳜病毒悬液，在按种病毒悬液后12h，16h， J。 形病毒的鱼体回接感染及病原性等作了详细研究b 但限于材料和研究系统，对鳜复杂的病毒病原及病原 细胞，戊二醛固定，包埋，用Leicaultracut．R超薄切 间相互作用的认识难以深入。经过敏感细胞的筛选， 片机(莱卡公司产品)制备超薄切片，经透射电镜(日 借助本实验室建立的鳜病毒体外扩增系统，并结合应 本电子公司产品)观察，透视电镜图像传输系统 用电镜技术，进一步对鳜两种病毒及与宿主细胞的相 GatanModel780Dualvision 互作用进行了仔细观察和研究，查明鳜球形病毒和 品)转存图像。 弹状病毒可在鱼类培养细胞中引起共感染。 2结果 1材料与方法 2．1病毒的形态特征 1．1鳜病毒的来源及宿主细胞病毒来源于患致 电镜下观察到鳜球形病毒的形态呈球状或近似 死性出血病的鳜组织匀浆液。宿主细胞为草鱼鳍细 球状，其大小不均一，多数病毒颗粒的直径为150nm 胞系(Gmsscarpfins，GCF)”J。 病毒粗提液的制备及体外扩增：取患病鳜的肝、 脾、心和肾等内脏器官，剪碎、匀浆，加入双抗(青霉 态是一端尖头、另一端平头的标准子弹状颗粒；由于 弹状病毒有一个中央核心，当观察到超微结构的横切 素100Iu，链霉素100肛g)置一20℃过夜，冻融后离心， 上清为病毒粗提液。过滤后接种到已长成单层的 面时，可见其圆心呈现一个黑点(图1B)。 收稿日期：2004一09一15；修订日期：2