学习情景三培养微生物.PPTVIP

①制标准曲线（OD~No） ②测菌液浊度，查图表得出细菌数量 浊度仪或721分光光度仪 （一）微生物生长繁殖的测定方法 仪器：浊度计、分光光度计等仪器测出菌液的浓度，然后再对照标准曲线，就可查出相似的菌数。 注意:培养液的颜色太深会影响测定结果，不要混杂其他物质。 适用范围：用于溶液的总细胞的计数。 缺点：灵敏度较差 优点：简便、快速、不干扰或不破坏样品。 浊度计 分光光度计 （一）微生物生长繁殖的测定方法 （4） 含N测定法 原理：细胞蛋白质量是比较稳定的，可反映微生物的生长量。通过菌体含氮量的测定求出蛋白质的含量，并大致算出细胞物质的重量。 方法：从一定量培养物中分离出菌体，洗涤后用凯氏微量定氮法测定出总氮含量，其值乘以6.25， 大多数生物包括细菌，细胞内的蛋 白质氮含量比较稳定，一般为蛋 白质干重15％~16％，平均为16％。 （一）微生物生长繁殖的测定方法 2.计繁殖数 提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？ 繁殖 提问：细菌繁殖的可见现象是什么？ 产生菌落（固体培养基培养）、菌液混浊（液体培养基培养） 计数原理：一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌. 缺点：慢 分固体培养法和液体培养法 （一）微生物生长繁殖的测定方法 2.计繁殖数 计算微生物的个体数目。适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子。 （1）显微镜直接计数法 又称为全菌计数法，借助显微镜观察测定 优点：快速 提问:有哪些缺点? 缺点：不能区分细菌的死活。 （一）微生物生长繁殖的测定方法 一．微生物的生长繁殖 （1）显微镜直接计数法——计数器(血球计数板）测定法 0.052cm2×25 0.1ml菌液 16＊25格或25*16格 （一）微生物生长繁殖的测定方法 提问：数了125个小格中有90个细菌，样品中的细菌浓度是多少？ (90个÷125) ×400 / 0.1ml =2880个/ml 适用范围：测定个体较大的细菌或原生动物 细菌个体若太小、过多，由于每一小格中细菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。 数数细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数125个小格），折算样品细菌浓度； （一）微生物生长繁殖的测定方法 2.计繁殖数 (2)平板菌落计数法 通过测定样品在培养基上形成的菌落数来间接确定其活菌数的方法。 依据：在稀释情况下一个菌落是由一个活细胞繁殖形成的。 （一）微生物生长繁殖的测定方法 （一）微生物生长繁殖的测定方法 无菌水 （2）平板计数法 第一步：菌样巧妙稀释 得到不同稀释度 （10-x）菌液 菌样被无菌水不同稀释倍率后平板培养图 10 - 2 10 -3 10 -4 10 -5 各取1ml于培养皿上,再加入不烫手固体培养基平板上混合均匀冷却。 第三步：培养 稀释度过低，菌落密集无法计数 可以计数，但数量过多，费时费力 数量合适，统计计算，作为结果 数量太少，误差因素太大，不做计数 第二步：接种平板 每一个细菌会生成一个菌落 一．微生物的生长繁殖 一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。 第四步： 计数 细菌数量=？ 细菌数量=数出的菌落数/稀释度 例如：10-5稀释度时菌落数为125cfu 细菌数量=125/10-5=1.25×107cfu/mL 平板计数法是采用最广的一种活菌计数法 如国标法水中细菌总数的测定 。 注意：作空白及取平行样（2～3组）均值减小误差 平均 （一）微生物生长繁殖的测定方法 （3）膜过滤法 方法：用微孔薄膜过滤定量的空气或水样，菌体便被截留在滤膜上，然后取下滤膜进行培养，计数其上的菌落数从而求出样品中所含的菌数。 适用范围： 对于细胞总数106个/ml的液体样品。 对膜干燥后，染色、计数 （一）微生物生长繁殖的测定方法 （3）薄膜计数法 薄膜——微孔滤膜（φ0.45μm） ②滤膜培养 膜有菌面冲上 原理——膜抽滤（细菌浓缩）+ 膜平板培养 + 计数 ①抽滤 （滤器及膜事先灭菌） （一）微生物生长繁殖的测定方法 ③统计计数 提问：假如 测出250cfu菌落，抽滤了50ml自来水，自来水中菌浓度是多少呢？ 250÷50ml=5cfu/ml自来水 样品中的细菌数量=菌落数÷抽滤样品的体积数 提问：如何用活菌计数法测定较脏的水样？ 减少滤液体积、无菌水稀释 （一）微生物生长繁殖的测定方法 （4）稀释培养法 原理：菌液经多次稀释后，菌数可随之减少直至没有。可从最后有菌生长的几个稀释度的3～5次重复中求最大概率数。 所以又叫MPN(最大可能数量)法。 （一）微