微生物的分离纯化与数量测定：平板分离法.ppt

目的要求; 基本原理 分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。 　　　平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。即用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管、滴管将一定体积的菌液移至平板培养基上，然后培养。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 包括 稀释涂布平板法 稀释混合平板法 平板划线法 ; 土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方，所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的，因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地。 本实验采用三种不同的培养基从土壤中分离细菌、放线菌、酵母菌和霉菌。; 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品的一个单细胞.统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。 由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以,长成的一个单菌落也可能来自样品中2-3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果,现在已倾向使用菌落形成的单位(colony-forming units,cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。; 实验材料;实验内容 ;操作步骤 ;制备土壤稀释液： 1. 称取土壤5g，放入带玻璃珠的无菌三角瓶中，加45mL无菌水，振荡20min，即为稀释10－1的土壤悬液。 　2.另取无菌试管6支， 各加9mL无菌水。取已稀释成10－1的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入一无菌水试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－2土壤稀释液。 　 3.同法稀释至10－3 -10－7土壤稀释液。 　在土壤???释过程中，可用一支吸管由浓到稀，稀释到底。 注意无菌操作。;土壤稀释液的制备和稀释液的取样（建议稀释到10-7即可）;;稀释混合平板法分离细菌;稀释混合平板法;倒平板的无菌操作;稀释混合平板法分离真菌;稀释涂布平板法分离放线菌;涂布操作;微生物的分离纯化录像;结果报告与思考题