提取琼胶糖的树脂新方法.docx

张锐1,孙美榕2(1.广东海洋大学现代生化中心,广东湛江524088;2.深圳市天泰生物技术公司,广东深圳518101)摘要:目的研究一种低成本制备琼胶糖的简便方法。方法以江蓠琼胶粉为原料,采用NH+型阳离子交4换树脂脱除1.5%琼胶溶液中的金属离子,再用OH-型强碱性阴离子交换树脂在恒温70℃下吸附沉降琼胶酯,提取出白色琼胶糖。结果测定的灰分和硫酸根含量均符合电泳琼胶糖的指标,凝胶强度达到560g/cm2,提取率达57%,测定了其结晶紫电泳和DNA的琼胶糖凝胶电泳。结论本方法提取的琼胶糖具有良好的电泳性能,适合用于生物化学和分子生物学的凝胶电泳研究。本法与EDTA22Na法和DEAE纤维素法相比,是一种低成本制备琼胶糖的简便方法。关键词:琼胶糖;强碱性树脂;凝胶强度;结晶紫电泳;DNA凝胶电泳中图分类号:R931.711TQ460.6文献标识码:A文章编号:100223461(2006)0320028205AnewmethodforextractingagaroseusingbasicresinZHANGRui1,SUNMei2rong2(1.Thecenterofmodernbiochemistry,GuangdongOceanUniversity,Zhanjiang524088,China;2.ShenzhenTiantaiBiotechnologyCo.,Ltd,Shenzhen518101,China)Abstract:ObjectiveTostudyanewmethodforextractingagarose.MethodsIn1.5%agarso2lution,addingthecationresinexchangedbyNH+4totakeoffmetalions,thenusingtheOH-basicresintoabsorbagaropectin.ResultsandConclusionTheextractingratewas57%,gelstrengthreached560g/cm2,theagarosehasgoodelectricityfunctionbymeasuringthegentianvioletelectrophoresisandtheDNAgelelectrophoresis,soitissuitableforbioche2mistryandmolecularbiologyelectrophoresis.ItisakindofsimpleandlowcostmethodforextractingagarosewhichbetterthantheEDTA22NamethodandDEAEcellulosemethod.Keywords:agarose;basicresin;gelstrength;gentianvioletelectrophoresis;DNAgelelec2trophoresis琼胶糖(agarose)是一种具有高凝胶特性的天然多糖,是高级生物化学、分子生物学、免疫学、现代生物工程技术的基础物质和重要材料,广泛用于核酸、蛋白质等生物大分子的凝胶电泳、对流免疫电泳、分离提纯相对高分子质量(103～108)物质如蛋白质、酶、核酸、肽类[1],以及研究病毒、噬菌体和细菌、细胞等,并且其应用范围在不断延伸,经过化学修饰的特殊功能琼脂糖凝胶产品不断面市,在生物学、医学研究领域起着越来越重要的作用。·28·琼胶糖广泛存在于琼脂中,为一种不含硫酸酯(盐)的非离子型多糖,以1,3连接的β2D2半乳糖和1,4连接的α23,62内醚2L半乳糖交替连接起来的长链结构,是琼脂中能够形成凝胶的成分,所形成的凝胶无色透明,低凝固温度,高融化温度,以及高凝胶强度。琼胶的主要成分是琼胶糖(agarose)和琼胶酯(agaropectin)。琼胶酯又称硫琼胶,中国海洋药物杂志2006年6月第25卷第3期ChinJMarDrugs,2006June,Vol.25No.3为非凝胶部分,是带有硫酸酯(盐)、葡糖醛酸和丙酮酸醛的复杂多糖,它在α2L2半乳糖的C6上带有硫酸基,相比琼胶糖,其更容易溶解在水中,不形成凝胶。由于琼胶酯的存在,其所带的负电荷使得琼脂的电泳性能大大降低,为此,必须去除琼脂中的琼胶酯,才能得到纯度较高的琼胶糖。国内文献报道的琼胶糖提取技术,主要有碘化钠法、聚乙二醇法、硫酸铵法[2]、ED2TA22Na法[3]、DEAE纤维素法[4],等。上述方法除目前常用的DEAE纤维素法外,其他方法都存在收率低,产品色泽差,或者凝胶强度低,生产成本高等问题。DEAE纤维素法虽然是比较成熟的工艺,但DEAE纤维素价格昂贵,限制了其制备琼胶糖的量。由于琼胶酯是带负电荷的多糖,因此可以被带相反电荷的高分子物质电