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第四章 药物定量分析与分析方法验证 吸收度的检定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/L H2SO4液至1000ml 波长(nm) 235(最小) 257(最大) 313(最小) 350(最大) E1%1cm 124.5 144.0 48.62 106.6 123.0-126.0 142.8-146.2 47.0-50.3 105.5-108.5 杂散光检查： 试剂 浓度(g/ml) 测定波长 透光率(%) NaI 1.00 220nm ＜ 0.8 NaNO2 5.00 340nm ＜ 0.8 内标法： 对内标物要求： a．内标物须为原样品中不含组分 b．内标物与待测物保留时间应接近且R1.5 c．内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质 内标法优点： 进样量不超量时，重复性及操作条件对结果无影响 只需待测组分和内标物出峰，与其他组分是否出峰无关 。 内标法缺点： 制样要求高；须寻找合适内标物 外标法特点： 不需要校正因子，不需要所有组分出峰 结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大 每次进样量应一致，否则产生误差 例：醋酸氢化可的松的含量采用HPLC法测定：取本品对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每ml约含0.35mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液（0.30mg/ml炔诺酮甲醇溶液）各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图。 另取本品适量，同法测定，按内标法计算含量。已知：对照品取样为36.2mg，样品取样为35.5mg，测得对照液中醋酸氢化可的松和内标的峰面积分别为5467824和6125843，样品液中药物和内标的峰面积分别为5221345和6122845，计算本品的含量 （二）GC法 1. 对GC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。 2. 测定法 除了HPLC方法外，还有标准加入法。 需验证的分析项目 1. 鉴别试验； 2. 杂质定量或限度检查； 3. 原料或制剂中有效成分含量测定； 4. 制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定； 5. 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。 准确度 精密度（包括重复性、中间精密度和重现性） 专属性 检出限 定量限 线性 范围 耐用性 分析方法效能指标的要求 1、非定量方法：用于鉴别试验、杂质的限量检查，只对专属性、耐用性和检测限有要求，其余均无须要求。 2、用于原料药中主成分或制剂中有效成分含量测定及溶出度测定，除了检测限和定量限外，其余均要求。 3、杂质测定或制剂中降解物测定：属于微量定量分析，除检测限不必要求外，其余七项指标均应有所要求。 第四节 生物样品分析方法的基本要求 1、被测定的药物和代谢物的浓度低； 2、样品大多需要分离和净化； 3、样品量少，连续测定时，很难再度获得完全相同的样品； 4、工作量较大； 5、要求很快地提供结果(毒物检测) 一、样品的种类、采集和贮藏 （一）血样：血浆、血清 血浆：选用最多。因血浆中的药浓可反映药物在体内的状况。而且血浆中药物浓度的数据报道较多，可供借鉴。 血浆是全血在加肝素、枸橼酸、草酸盐等抗凝剂的全血经离心后分取，量约为全血的一半。 血清则是在血液中纤维蛋白元等影响下，自然凝结引起析出血块，离心取得。 （二）唾液 唾液中的药物浓度通常与血浆浓度相关。样品易得，取样无损害，尤易为儿童接受。有些可从药物唾液浓度推定血浆中游离药物浓度。 （三）尿样 尿样测定主要用于药物剂量回收研究、药物肾清除率和生物利用度等研究，以及测定代谢物类型等。体内药物清除主要是通过尿液排出，药物可以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物形式排出。尿样常需加入防腐剂。 （四）贮藏 血浆和血清需采集后及时分离，一般最迟不超过2h，分离后再置冰箱或冷冻柜中保存。 尿样应立即测定，若收集24h的尿液不能立即测定时，可加入甲苯、氯仿、醋酸等防腐剂，一般可保存24~36h，也可加入叠氮化钠可较长时间保存。 唾液在保存过程中会放出二氧化碳使pH值升高。另唾液中含有粘蛋白，须离心后冷藏或冷冻 二、生物样品的预处理技术 样品的制备 要考虑：药物的理化性质 药物测定的目的 选用的生物体液和组织的类型