近江牡蛎HSC70基因对溶藻弧菌感染的反应.pdfVIP

中国水产科学2012年5月，19(3)：500—508 Journalof SciencesofChina Fishery 研究论文 DOI：10．3724／SP．J．1110．2012．00500 近江牡蛎HSC70基因对溶藻弧茵感染的反应 刘志刚，张其中，张占会，崔淼 暨南大学水生生物研究所，热带亚热带水生态工程教育部工程研究中心，广东省高校水体富营养化与赤潮防治重点实 验室，广东广州510632 摘要：人工注射溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)感染近江牡蛎(Crassostrea hongkongensis)，通过实时荧光定量 RT-PCR方法检测了近江牡蛎6种不同组织器官(外套膜、鳃、消化腺、闭壳肌、心脏和血细胞)中HSC70基因表 达量的变化；同时采用平板活菌计数法测定了近江牡蛎不同组织器官中溶藻弧菌菌量的变化。结果显示。人工注射 感染溶藻弧菌后，近江牡蛎6种组织器官中HSC70基因表达量均显著性升高(尸O．05)，且随时间变化均呈现出先升 高后恢复至对照水平的趋势；其中鳃组织中HSC70基因分别在第6小时和第72小时出现2次显著性高表达，且在 第72小时的表达量高于第6小时(尸0．05)。在多数组织器官中，HSC70基因出现显著高表达后便急剧下降至对照 水平，而在消化腺中高表达持续的时间长达18 h(第6-24小时)。在注射感染溶藻弧菌后第6小时，血细胞中HSC70 基因的表达量达到峰值，接近于对照水平的15倍；而在其他组织器官中，该基因表达峰值仅为对照水平的2．5倍左 右。人工注射感染溶藻弧菌后3h，3种组织(消化腺、闭壳肌和血淋巴)中均能检测到溶藻弧菌的积累，其中闭壳肌 中含菌量最高，6h时闭壳肌中含菌量急剧下降，随后又增加并维持在一定水平直至72h；消化腺中菌量随着时间 推移而增加，到达峰值后又逐步下降；血淋巴中，溶藻弧菌含量整体上随时间不断增加，到48h稳定在较高水平。 各组织中HSC70表达量与溶藻弧菌含量之间存在一定的关联性，尤其在溶藻弧菌攻击的靶器官(消化腺)中最为明 显。由此可见，病原菌感染可以诱导近江牡蛎HSC70基因高表达，并且HSC70可能参与了机体抗病原菌感染的相 关作用，这为进一步研究近江牡蛎HSC70基因在抗病免疫中的作用机制奠定了基础。 关键词：近江牡蛎；HSC70基因；溶藻弧菌；基因表达；实时荧光定量PCR 中图分类号：$944 文献标志码：A 文章编号：1005—8737--(2012)03—0500-09 shock 热休克蛋白(heat HSP70家族具有重要的生物学功能，在细胞中主 proteins．HSPs)是生物 细胞(包括原核细胞及真核细胞)在各种应激(包括 要充当分子伴侣，介导新合成多肽的正确折叠和 外界环境应激和体内病理生理应激)条件下所产 装配，帮助错误折叠蛋白恢复原始结构以及协助 生的一类由热休克基因所编码的伴随细胞蛋白【l】。 蛋白质的定向运输13圳。最新研究表明，HSC70除 HSP70家族作为HSPs中重要成员之一，它主要可 了作为分子伴侣之外，在免疫调节、炎症反应以 以分为两类：一种是诱导型HSP70，通常在细胞 及抗病原菌感染中也起重要作用，从而被认为是 中不表达或表达量极少，但是在热应激或其他应 生物体免疫系统中的重要成分【5。】。 激原的作用下，则表达迅速增加；另一种为组成 近江牡蛎(Crassostrea shock 型HSC70(heatcognate70)，通常在细胞内 南方沿海人工养殖的主要经济贝类，其肉鲜味美， 有组成型表达，并且能被外界刺激所诱导12J。 营养丰富，具有很高的经济价值。随着养殖规模 收稿日期：201l—07—20：修订日期：2011-1l—21． 金一等资助金(2007042144)． 通信作者：张其中。教授。博士生导师．Tel：020E-mail：zhangqzdr@126．tom