糖多孢红霉菌染色体基因快速失活技术研究及应用研究.pdfVIP

1 摘要 糖多孢红霉菌染色体基因快速失活技术 研究及应用 摘 要 红霉素(erythromycin, Er)是由糖多孢红霉菌(Saccharopolyspora erythraea)合 成的次生代谢产物，为一类广谱大环内酯类抗生素，在临床上具有广泛应用。2007 年，糖多孢红霉菌基因组全序列测序完成，标志着红霉素的研究进入了后基因组 时期。为加速糖多孢红霉菌基因功能研究，本研究建立了糖多孢红霉菌线性片段 同源重组一步基因突变技术，并开展了应用研究。 本实验以KR6 基因为材料，以Thio 抗性基因（tsr ）作为筛选标记，在其上 下游分别连接KR6 基因突变序列的两侧同源片段，利用PEG 介导原生质体转化 将线性 DNA 同源片段转入糖多孢红霉菌，通过tsr 基因两侧同源片段与染色体 同时重组，一步实现 KR6 基因快速敲除；线性同源片段长度与糖多孢红霉菌