羊瘙痒病金黄地鼠模型的研讨.pdfVIP

734 2006学术年会 羊瘙痒病金黄地鼠模型的研究 刘全国’ 魏传忠 马贵平 李冰玲 史喜菊 李炎鑫刘旭辉 (北京出入境检验检疫局疯牛病检测中心北京101113) 绵状脑病(1’sE)或朊病毒病，既可引起人类疾病，也可引起动物疾病，这类传染病可通过不同途径传染到许多实验动物。由 于我国尚未发现羊瘙痒病或疯牛病，研究缺乏相关的病理性实验材料，迫切需要建立实验动物模型作为检验检疫的阳性病 例。染病动物的中枢神经系统含有高浓度感染因子，通过组织匀浆，破碎细胞，再低速离心去除细胞碎片，收集合有高浓度 感染因子的上清液，腹腔注射263K感染因子至3只4周龄雌性金黄地鼠，经过105±5d的潜伏期，其中两只地鼠染病，一只 尚无临床症状。通过观察临床症状、脑组织病理、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹检测，证实染病地鼠为传染性海绵样脑 病。 关键词：海绵状脑病；羊瘙瘁病；免疫印迹；实验动物模型。 性海绵样脑病(髑E)，既可引起人类疾病，也可引起动物疾病，这类传染病可通过脑内注射等途径传染到 历史。克雅氏病(CJD)最早出现在20世纪20年代初。80年代初英国的饲料工业改革及大量使用动物源 饲料，造成英国疯牛病的产生，随后几年英国再次爆发人类因食用污染了疯牛病病毒的牛肉而引起的新 型克雅氏病，俗称人类疯牛病，引起各国重视，纷纷加大研究力度，许多科学家开展各种动物模型的研究。 朊病毒是一种传染性的蛋白质，不含疾病所特有的核酸[2]。这种传染性的蛋白质是由正常的生理型蛋白 质在特定外因和内因的“诱导”下，蛋白质的空间构象发生改变，由a螺旋变成p片层，形成传染性的病理 型蛋白质。在临床期，通常可在中枢神经系统中检测到蛋白酶K抗性蛋白质，并且，随着疾病程度的加重 而增加。 1材料与方法 1．1试剂 P一 W．B．reagent(美国SantaCruz公司)，Nonidet 蛋白酶K(Merk)，PVDF膜(MiUipore公司)，ECL Bis—Tis NuPAGELDS 40，脱氧胆酸钠(Vluk丑)，NuPAGEGel，4X Samplebuffer，NuPAGESampleReducing MOPSSDS life Agent，NuPAGERunningBuffer(Invitrogen Prion单克隆抗体6H4识别人P押氨基酸序列144—152(瑞士PhonicsAG)，HRP标记的羊抗鼠IgG(美国 JacksonImmunoResearchLaboratories，INC．公司)，其他试剂均为国产分析纯。 1．2动物感染试验 000 鼠体内，另3只同龄正常金黄地鼠腹腔注射100p．IPBS作为阴性对照。试验废弃物需经2N强碱或22 @bjciq．殍Ⅳ．cn 兽医部分 735 有效氯处理2h，再进行两个循环的蒸汽134度高压灭菌处理，确保实验室生物安全。 1．3常规病理组织学检查 取正常金黄地鼠和染病金黄地鼠的大脑、小脑组织，10％福尔马林固定，甲酸处理lh，自来水充分冲 洗，石蜡包埋，制成5t,．m的切片进行苏木素一伊红染色[4’51(H．E染色)，检查灰质神经元有无海绵状变 性，神经元核周体有无单个或多个空泡，星形胶质细胞是否肥大增生。 1．4免疫细胞化学法(Immunohistochemistry，IHC) g-]C检测按马贵平[5】已发表的方法检查病理组织切片中有无Prr颗粒。大脑和小脑组织做成切片， otin—peroxidasecomplex)试剂，后者可结合到第二抗体上。之后再加入底物AEC，即可出现颜色反应。 最后用苏木素复染，PrPc呈红色。阴性对照用PBS代替一抗加在羊瘙痒病脑组织切片上。 1．5免疫印迹分析 mMTris2HC