OPRM1基因PCR产物和测序产物三种纯化方法的比较.pdfVIP

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2018-01-02 发布于广东
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OPRM1基因PCR产物和测序产物三种纯化方法的比较.pdf

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12O 现代检验医学杂志第 27卷第 1期 2012年 1月 JModLabMed，Vo1．27，No．1，Janua．2012 OPRM1基因PCR产物和测序产物三种纯化方法的比较李少英，马晓燕，张双全，张慧敏，黎青 (广州医学院第三附属医院妇产科，广州 510150) 摘要：目的探讨一种快速、简便、效果好的OPRM1基因PCR产物和测序产物纯化方法，建立稳定的DNA测序技术平台。方法采用乙醇／醋酸钠、过柱和 SAP-Exonuclease1结合BigDyeXterminatorPurificationKit3种纯化方法，对 5O份 OPRM1基因PCR产物和测序产物进行纯化效果的比较。结果 SAP—ExonucleaseI法对 PCR反应产物进行纯化的回收率显著高于乙醇／醋酸钠和过柱法，分别为 0．86土0．01，0．48土0．08，0．65-4-0．01(t一32．5，P 0．001；t一86．1，P 0．001)；BigDyeXterminatorPurificationKit法对测序产物进行纯化成功率显著高于乙醇／醋酸钠和过柱法，分别为 100 ， 62 和 84 (x。一23．46，P 0．001；一8．70，P一0．003)。结论 SAP-ExonucleaseI结合 BigDyeXterminatorPurifica— tionKit是一种快速、简便、效果好的测序纯化方法。关键词：脱氧测序法；虾碱性磷酸酶；核酸外切酶I；阿片受体基因中图分类号：Q503 文献标志码：A 文章编号：1671—7414(2O12)O1—12O一03 doi：1O．3969／j．issn．1671-7414．2012．01．039 ComparingAnalysisofThreeDifferentPurificationM ethods forPCR andSequencingPruductsinOPRM 1GeneSequencing LIShao—ying，MA Xiao—yen，ZHANG Shuang—quan，ZHANG Hui—min，LIQing (DepartmentofObstetricsandGynecology，theThirdAffiliatedHospital， GuangzhouMedicalCollege，Guangzho“510150，China) Abstract：Objective Lookingforaquick，simpleandeffectivepurificationmethodforPCRandsequencingproducttoestab— lishstableDNA sequencingtechnologyplatform．Methods 50PCR productsandsequencingproductsofOPRM 1genewere purifiedbyethanl／sodium acetate，spin—columnandSAP-ExonucleaseIcombinedwithBigDyeXterminatorPurificationKit． Results TherecoveryrateofPCR productsthatwaspurifiedbySAP-ExonucleaseImethodswassignificantlyhigherthan byethanl／sodium acetateandspin-columnmethods．Theirrecoveryrateswere0．86土0．01，0．48士0．08，0．65士0．01(￡= 32．5，P0．001；￡一86．1，P0．001)．AndthesuccessratesofsequencingproductsthatwaspurifiedbyBigDyeXterminator PurificationKitwassignificantlyhigherthanbyethanl／sodium acetateandspin-column．Theirsuccessrateswere100 ， 62 and84 (x。：23．46，P 0．001； =8．70，P=0．003)．Conclusion ThemethodofSA