129Sv×C57BL6 F1胚胎干细胞系的建立.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十羔届学术研讨会论文集 ，129／Sv×C57BL／6 F1胚胎干细胞系的建立 邸科前陈辉高淑敏温晓辉李相运’ (溺北农娃大学动物辩技学院，海=l艺保定071001) xC57BL／6 捅要：目的^k129／Sv F1小鼠的早期胚胎申分离和培养胚胎千纽胞(Es细胞)，并对其 生物学将陡进行初步鉴定。方法收集C57小鼠(和129公鼠交配后)3．5d胚龄的囊胚，分离内细胞团 (ICM)细胞进行培养，以小鼠原代胚胎成纤维细胞(PMEF)作为饲养层，细胞扩增传代，观察集落 的生长情漉并通过通过腹股沟皮下注射嚣S细胞观察能番得到畸船瘤。结果Es细胞兰集落样生长， 注射屠，能够得到畸胎瘤。符合4、鼠Es细胞的一些特蛀。结论129／Sv×C57BL／6JF1小鼠囊胚在 原代小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上可以发育成Es细胞，并且具有ESm胞的特性，能够得到畸胎瘤。 关键词： B6SVFl小鼠；E8细胞；分离培养；畸胎瘸 stem cell 胚胎干细胞(embryoniccells，ESCs)是从囊胚内细胞团(innermass，I咖分 予细胞的未分化状态、正常二倍体核型煮无限增殖髓力，具有体内外分化能力和稀系嵌合能力(Nagy et et al，1990：Egganal，2001)，并可对ES细胞在体外进行遗传操作、选择和冻存两不失 其多能性。小鼠ES细胞不仅可以作为体外研究细胞分化和发育调控机制的模型，而且还可以作为一 种载体，将通过同源重组产生的小鼠基因组的定点突变导入小鼠胚胎，得到转基因小鼠，实现在个 体水平上的基因剔除，为更深入地研究基因结构与功能、胚胎发育、癌症以及各种遗传瘸的极理开 辟了新途径。小鼠ES细胞的建系工作是实现小鼠ES细胞途径的基础。 不嗣小鼠品系来源的Es细胞有不同的特性，如图际上通用的ES细施系大多是从129品系小鼠中 获得的，但129晶系小鼠不宜用于免疫学和细胞组织移植研究：C57BL／6小鼠在动物行为研究中得 到广泛应用，并且易于饲养和管理，克服了129小鼠自身存在的诸多缺点，具有致癌性不敏感和对 鼠痘病毒有良好的抗性等优点。由此可觅，为了各种不同的研究和应用目的，最好能有不同品系来 源的Es细胞系。谗多实验室的工作都已证明爝于穗系嵌合的翳细胞应尽可能是处于传代早鬏的细 胞，且不同小鼠品系来源的ES细胞的种系嵌含能力有熙著差异，而且有报道证明Es细胞的遗传背 et 景的杂合度是影响嵌含体生存能力的重要因素(Egganal，2001)。因此本实验拟以2种不同遗传 背景的小鼠为材料，建立小鼠的ES细胞系，并通过体内分化来检测ES缀胞的多能性。 l材料和方法 1．1 溶液配制 无钙镁PBS缓冲液、胰蛋白酶消化液、DMEM培养液、Es细胞培养液、丝裂霉素C溶液以及妣胚胎 et et 操作液的配制见Erbachal(1994)和Nagyal(2003)。 1。2 小鼠脸歹k成纤维细胞盼分离培养 内脏、四肢、尾，用PBS洗2次。用眼科剪剪至1删大小的组织块，向组织块中加入 11 适量消纯滚，消化5～lomin。鸯IDMEM培养液终止消纯，并用100m澹纱过滤于lo她离心管中， 1000～1500 r／min离,t∑5min，弃去上清波，加入5mLDMEM培养液并吹打，使细胞悬浮。二次离心、 弃上清液，加入3mL培养液，吹打制成细胞悬液。移入直径9cm培养皿并补加8mL培养液，置入含 基金项目；国家自然科学基金(No资助。 撵者箍介：邸辩蓠，勇，在读磺士研究生，汉族，1981年2劳生，获事蘧胎王程与胚骆干细胞研究正作。 通讯作者：；攀相运，男，博士，教授，汉族，1968年11月生，从事胚胎工程与胚胎于细胞研究工作。Email： Tel：0312—7528459。 lixiangyun35@yahoo．com．cn