鹅源副粘病毒NA1株与NDV F48E9株抗原变异关系分析.pdfVIP

禽娄传染病 3讨论 3．1v基因cDNA的扩增 由于NDvv蛋白是通过对P基因的编码来实现的(在第484位点插入1个G)，所以要 想体外成功表达V蛋白，必须对V基因进行插入突变才行，本试验在2次PCR反应过程中。 通过突变引物v2引入突变点，在第1次PcR反应扩增出Vo片段后，获得引入突变的Vo 片段，然后以Vo片段为上游引物和下游特异性引物V3进行第2次PcR，通过对PcR反应 条件的反复摸索，最终找到了最佳的反应条件。成功扩增出V基因的全长cDNA。 3．2v基因的表达 将扩增的v蛋白基因全序列亚克隆到pcI．neo中去．构建真核表达重组质粒pcI-V，测序 表明重组质粒pcI．v构建成功，将构建好的重组质粒pcI．V转染Ver0细胞，经过G418的筛选， 得到的阳性细胞经过间接免疫荧光试验说明pCI．v成功表达V蛋白，将得到的阳性细胞进行 blot检测，能够获得特异性条 扩大培养进行细胞裂解，蛋白提取，进行sDs—PAGE和westem 带，说明表达蛋白用全病毒高免血清进行we咖mblot检测，结果显示，表选蛋白具有鹅源副 粘病毒特异性，有良好的反应原性和免疫原性。由于鹅源副粘病毒P基因和V基因序列存在 一定的同源性，因此，用鼠抗鹅源副粘病毒高免血清也可以检测到V蛋白的表达，说明血清 中抗P蛋白的抗体部分结台到了表达的目的蛋白质上，但多克隆血清的反应灵敏度较低，特 异性较差。具体原因是由于血清的主要抗体大多是NDv外部蛋白F、HN等蛋白的抗体，P蛋 白的抗体比例相对不高，同时，用全病毒免疫时可以刺激产生V蛋白特异性抗体，说明V蛋 白很可能以某种形式与病毒粒子结合，而且在病毒复制过程中，V蛋白的表达水平相当高t 其具体情形和机制还有待进一步研究。 参考文献略 鹅源副粘病毒NA．1株与NDVF48E9株抗原变异关系分析14 李志杰，T壮’ (吉林大学预防兽医学国家重点学科动物重要痛原与疫病研究室。吉林长春，130062) 擒要鹅泺副粘病毒病是近年来新发现的禽类传染病，现已确定谊病毒为禽副黏病毒I型，即新城疲病毒 的一个变种．本课题组对鹅源副粘病毒NA．1株和鸡新城疫F48E9强毒株的抗原变异性进行了研究．经交 叉血凝抑制试验．鸡胚交叉中和试验、细胞交咒中和试验，交叉动物保护试验，采用R值分折方法，用抗 原比值定量确定两种抗原的相似程度，R值分别为O．446和n50．0．56．表明，二者确实存在抗原差异，对鹅 源副粘病毒病的防控具有重要的理论价值和实用价值． 关键词鹅潭副粘病毒病；鸡新城疲；抗原变异：R值；病毒中和试验 disease 鸡新城疫病毒(Newcastle 起鸡群高致死性的烈性传染病。虽然不同毒株的毒力表现出很大差异，但以往认为水禽和其 他禽类通常抵抗力甚强，即使强毒株感染也不表现症状Ilj。而近年来，由新城疫病毒引起鹅 的临床感染在我国华南和华北地区逐渐形成流行趋势。本病最早于1997年被华南农业大学 辛朝安8I和扬州大学王永坤在我国首次发现，现已确定该病毒也属于APMv．I，即新城疫 病毒的一个变种。鹅源副粘病毒的发生与流行说明随着新城疫病毒对禽类易感谱的变化以及 新的基因型的不断变化，该病毒的抗原性也在不断的变化。因此．无论从流行病学、病理变 化、免疫学特性、基因水平来看，鹅源副粘病毒与经典的新城疫病毒在抗原和致病性上发生 ¨基金项目：国家自然科学基金资助项目(批准号：3057n75) 作者简舟：辛志杰(1982．)，女．满族，内蒙古赤峰市，博士研究生．研究方向：人兽共患传染病的防治 ·通讯作者：T壮，吉林大学畜牧兽医学院预防兽医学系，教授，博士生导师． 676 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 了较大变异伫】。由于二者是我国养禽业最为严重的传染病，判断其抗原性变化．对预防控制 鹅源副粘病毒病和鸡新城疫不仅具有重要的理论价值而且具有重要的实用价值。 l材料和方法 1．1材料 1．1．1毒株 鹅源副粘病毒NA—l株由本实验室分离鉴定、保存；鸡新城疫病毒F48E9株购自中国兽 药监察所。 1．1．2 sPF鸡胚 购自山东农科院SPF鸡场，本实验室自行孵化。 1．1．3试验用鸡，鹅 购自非疫区且无本病母源抗体的鸡、