鸡传染性贫血病毒CAV M9905的分离鉴定.pdfVIP

主笪董壁璺堕呈叁查堑芏笪盒蔓士选芏茎受i±垒壁塞塞 鸡传染性贫血病毒(CAVM9905)的分离鉴定 王秀荣 王笑梅杨林 宋秀龙邱冬 (中国农业科学虢哈尔滨兽医研究所，哈尔滨．150001) 摘要从13日龄发生贫血病肉仔鸡组织中分离到鸡传染性贫血病病毒(cAV)，分离物接种于1日龄sPF雏 鸡可复制出车病。分离物接种于MDcc—MsBl细胞．可引起细胞死亡，感染细咆用间接免疫荧光捡测可与已知阳性 血清反应，感染细胞悬液接种于1日龄sPF雏鸡同岸可复制出本病。分离物能被已知cAV阳性皿清所中和．并能 利用PcR技术扩增出特异性寡聚棱甘酸片段。分离物经70℃5mjn、50％氯仿l5min处理后，可引起1日龄sPF雏 鸡发生cIA．因此认为分离物是cAV，并命名为cAVM9905。 cAV f关t词cAVM9905株分离鉴盎 ～ infectious 鸡传染性贫血病(chicken anemia，cIA)最早被称之为贫血综合征、贫血一皮炎综合 征、出血性贫血病、贫血因子病等。其病原于1979年首次分离并确定，早期被称作鸡贫血因子 anemia anemla infectiousvirus．cIAV)．以 (Chickenagent，cAA)或鸡传染性贫血病毒(chicken anemia 后逐渐统一称作鸡贫血病毒(chickenvirus．cAV)。 液中纯化的病毒粒子，经过负染后成球状，直径为19～24nm，呈3、5对称。病毒粒子在氯化铯中浮 密度是1．35～1．369／ml，低于细小病毒的密度。从感染细胞培养物中纯化得到的鸡贫血病毒呈典 型的对称体，这在动物病毒中可能是独特的。cAV对乙醚和氯仿有抵抗力，对酸(pH3)作用3h后 化为骨髓黄化和胸腺萎缩。发病鸡骨髓中的红髓组织被脂肪组织替代，眼观呈黄色、黄白色甚至为 白色；胸腺明显萎缩，仅为正常鸡的十分之一或更加严重。 979年由日本学者 cAV广泛流行于世界各地，呈垂直和水平传播。鸡传染性贫血病毒在1 Yuasa等首次报道以后一]，相继在西德、瑞典、英国、丹麦、波兰、美国、澳大利亚、荷兰及巴西等国陆 续证实了本病的发生。我国于1992年首次分离到此病毒。2]。cAV分布及其广泛，存在于所有主要 家禽生产国。在日本、德国瑞典英国加拿大和美国，经常鸡群中分离到cAV。澳大利亚、一些欧洲、 非洲和亚洲国家通过血清学普查，发现普遍可以检测到cAV抗体阳性o]。1999年，黑龙江省内有 不同规模发生鸡贫血病“1，本实验室对当地流行的cAv毒株进行了分离鉴定工作，介绍如下。 l材料 1．1 cAv标准毒cux一1毒株，由中国农科院哈尔滨兽医研究所疫病防制室提供。 1．2 sPF鸡由中国农科院哈尔滨兽医研究所sPF鸡饲养实验室提供。 1．3 MDcc—MsBl细胞由中国农科院哈尔滨兽医研究所疫病防制室提供。 1．4 cAv阳性血清抗cAV—Gifu标准株阳性血清，来源于比利时农业生化研究中心禽病毒与 生物工程研究所。 1．5兔抗鸡(IgG)荧光抗体购于sigma公司， 一182— 主鱼量堑璺匿芏量点童堂堂叁星±蛊芏苎盟过坌地塞塞 1．6 cAV DNA片 断。由大连宝生物工程公司合成。 1．7 EDTA(pH8．o) TEN缓冲液o．1mol／I．NacI，10mmol／LTris．clpH8．o)，lmmol／L 1．8病料来源来自黑龙江省牡丹江市发病肉仔鸸群，艾维茵品种，13日龄。共抽样取5只，测定 其平均红细胞压积值为24．8％，剖检可见明显的胸