黄芪多糖对小鼠1细胞胚胎体外发育效果初步观察.pdfVIP

中国育牧兽医学会动物繁殖学分会第十三届学术研讨会论文集 黄芪多糖对小鼠1．细胞胚胎体外发育效果初步观察 张建芳 高建明★ 李桌 孟令君 邸冉 (北京农学院动物科学技术系，北京102206) 捅费 胚发育率和细胞数鼙的影响，从而探讨黄芪多糖对胚胎体外发育及其促细胞增殖方萄的作用。结果： 对照组(33．3％和41士1．7；0％和0)。由此试验表明，中药有效成分黄芪多糖能促进小鼠早期胚胎 的体外发育及胚胎细胞增殖，并对分割取样詹胚胎的体外培养有促进作用，且分割样本数5对胚 胎发言比较有利。 关键词 黄芪多糖；，{、鼠；l一细胞骚胎；体外培养；胚黯分割；细胞计数 哺乳动物早期胚胎体外培养技术在发育生物学、胚胎移植等领域的研究工作中都有很重要的作 用。近年来，随着转基因、克隆技术的进展，胚胎体外培养技术显得熙为重要。因此，建立稳定、 可靠的哺乳动物胚黪的体乡}培养系统，已成势当前这一领域噩重要研究课题之一。而胚胎分割技术 作为一神辅助手段，将与其它生物胚胎生物技术相结合为转基因、性别鉴定等技术提供可操作的方 vitroblockof 法。哺乳动物胚胎体外培养时存在早期胚胎发育阻断(in 鼠受精穿帮早凝胚胎，其发育常停滞于2．细胞期，此现象称为体外2一细脆阻滞(2．cellblock)翻，克 服这一现象具有着广泛面重要的应用价值。耳裁体外培养还存在很多令研究者们困惑的问题，如体 外培养胚胎发育较体内相对迟缓、囊胚发育率低、细胞数量少、囊胚体内移植妊娠率低，个体形成 率远远低子正常妊娠吲等等。因此，人稍在改进培养液亿学成分的同时，越来越关注体外培养胚胎 的发育迟缓以及胚胎质量等问题。目前虽然已经逐步建立了体细胞与胚胎共培养的体系，测用各种 生长因子，提高了克服阻断的成功率，胚胎的质量也在不断的提高，但还是无法从根本上解决体外 培养体系存在的囊胚发育率和移植妊娠率较低等问题。 鉴于中药在抗氧化、健细胞增殖等方嚣的研究进展，能从整体性、多靶点、全方位改善存枧体 的生理状态等特点，以及在本实验室前期利用中药有效成分对小鼠2．细胞胚胎体外培 养研究[5-61的基础上，本研究以圜际通用的封闭群ICR小鼠l罐日胞胚胎作为实验材料，通过添加不同 浓度的中药骞效成分黄芪多糖，观察其对小鼠l一细胞胚胎体外发育、孵优题胎细胞数以及切害l取样 后胚胎培养效果的影响，从而为进一步探讨中药有效成分对胚胎发育及在促细胞增殖方面的作用和 可能的机理奠定基础，并为其它哺乳动物早期胚胎体外培养和提高体外胚胎的质量提供可借鉴的参 考资料秘开辟新的途经。 基金项尉：北京市娄组织部优秀人才项目和北京市农业应用瓶技术实验室开放课题项目 柞者简介：张建芳，女，27岁，j匕京农学院硕士研究生 ★遥讯作者 中隧畜装普羧学会动褥繁殖攀努会第十童嚣学零研讨会论文集 重材料与方法 1．I试验动物选取健康、健成熟的ICR系SPF缀(无特定病源)小鼠(赌鑫北京实验动物中心)， 雌鼠体震爨荛28．30 g，雄鼠体矮量为33--38g。雌雄分笼饲养在燮湿、自然光照、自巍饮水麴条 件下，罴霜全赞繁夔颗粒饲料键养。经～周蘸适应性饲养蠢，按常攮方法进行超搂处理。 1．2试验方法 1．2。l起排及胚殆收集参照资料f71选撵润情期鞫发情蓠粼的雌性小鼠，鹱腔注射PMSG15IU／只， 果受精卵还被颗粒缨臆包被，黉|l髑0。l％豹透翡痰黢酶处理干净螽臻PBS洗涤3次，收集舔爝。 为对照缎，以mCZB分别添加黄芪多糖(Astragalus 1．2．3耧胎墙荠将辩放在50奠毛约培器微滴孛，每个微滴放萎lo—15枚舞，覆盖石蝤浦，置于37 每隔24h观察(倒鬣显微镜，OLYMPUS，IX71)记录胚胎发育情况，培养至144h结束。 1．2．4联雅分裁及分割怒秘培养将上述体终培器72h获褥的桑椹簸凌培养液中移至含PBS基础液 小滴的培养皿中，在体视镜下用自制玻璃分割针进行徒手切割取样。根据切割取样的纲胞数目将切 割取样殿胚胎分为两组，分别为取样细臆数≤5个缀和取样缀魏数5个缓。切割取样艇在糨应培养 液孛培养至7强，阀隔24h躐察。 1．2．5胚胎细胞计数将胚胎置于0．5％柠檬酸钠低渗液中作用0。5—1min后移到载玻片上，尽量少带 液体，加l滴(约20“屯)4％的乙酸，约0．5min后吸去乙酸便胚胎顺势铺震，空气中稍濠于，再叛10％ Giemase染液染色1