鹅副粘病毒广西分离株的生物学特性研究.pdfVIP

新城疫 鹅副粘病毒广西分离株的生物学特性研究 蒋玉雯 黄安国 白安斌 陈西宁 梁家幸 梁保忠 杜坚姚瑞英 (广西区兽医研究所，南宁530001) [摘 要] 鸡、番鸭、鸽、猪、lJJ羊、兔、豚鼠、黄鳝及人。型红血球。56 日龄肉鸽发病率达83．3％(5／6)，死亡率100％。对1日龄肉鸭无致病性。 [关键词]鹅，副粘病毒；分离株；生物学特性 鹅副粘病毒病自1997年由我国学者王永坤首次报道以来。已广泛流行于广东，山东、安徽、浙江，福建、上海、四 川、吉林、广西、云南等许多地区，对养鹅业造成了很大的损失。2003年6月份以来，武鸣某养鹅场从浦北县购进 680只雏鹅】天后开始陆续死亡，『临床表现，拉白绿色稀便，鼻粘液增多，呈现扭头等明显的神经症状，食欲减退 或废绝。我们对其病原的生物学特性进行了研究。现将结果报告如下： 1材料和方法 1．1材料 鸡新城疫阳性血清由广西大学动科院禽病研究室惠赠，禽流感H5阳性血清购自哈兽研，小鹅瘟抗血清由扬 州大学王永坤教授惠赠。10日龄鸡艇、1日龄雏鸡由购自广西兽医生物药品厂的非免疫蛋孵化而来。1日龄肉鸭， 10日龄雏鹅、30日龄肉鸽分别来自南宁市郊健康鸭场、鹅场、鸽场。均未经新城疫疫苗和禽副粘病毒疫苗免疫。 1．2病料处理 对病鹅的脑、肝、脾等病料先进行细菌分离、镜检。然后按常规方法制成l；5的乳剂，离心取上清液，检验无菌 后，一30C保存备用。 1．3病毒分离 1．3．1鸡胚分离病毒 将处理好的病料0．gml／胚经尿囊腔接种10日龄非免疫鸡胚各4枚，38‘C孵化，并设对照。 1．3．2鸡胚成纤维细胞(CEF)分离病毒 将适应于鸡胚的第二代病毒尿囊液0．1ml接种于CEF细胞，37c培养，并设不接毒对照。 1．4病毒鉴定 1．4．1血凝与血凝抑制试验 用豚鼠血球测定分离病毒的血凝滴度，然后用新城疫阳性血清、禽流感H5血清型阳性血清做m凝抑制试 验。 1．4．2 RT—PCR试验 将分离毒鸡胚尿囊液送广西大学动科院禽病教研究进行RT--PCR检测。 果。 571— 生垦董塑壁匡堂金鱼宣堂佥盒蔓土三选!塞查堑过盒迨窒塞 1．5病毒毒力测定 根据新城疫病毒毒力测定的标准进行。 1．5．1分离毒对鸡胚最小致死量的平均死亡时间测定 按规定的标准方法进行，最后按公式计算出MDT。 1．5．2 1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)的测定按规定的标准的方法进行，接种后每天详细记录雏鸡的正常、 发病和死亡情况，并没对照，根据积分和公式计算出1CPI。 1．6病毒理化特性测定 1．6．1病毒对氯仿的敏感性测定 用5％氯仿处理病毒10min，然后将病毒接种于10日龄鸡胚尿囊腔，0．1ml／每胚，接4个胚，并设对照。 1．6．2病毒对热的抵抗力测试 将病毒分装于小瓶中，分别于水浴箱中56℃、60C作用10min，60 枚，0．1ml／每胚，并设对照。 1．6．3病毒对pH4的抵抗力测定 1．6．4病毒血凝特性测定 按常规方法采集鸡、番鸭、鸽、猪、山羊、兔、豚鼠、黄鳝及人O型血球，经离心洗涤三次后，用PBS液分别配成 1％红血球悬液，用试管法对分离病毒进行HA试验，分别记录结果。 1．7致病性试验 1．7．1对11日龄雏鸡的致病性试验 用23—7 服0．1ml病毒原液，对照鸡注射生理盐水，隔离观察。 1．7．2对10日龄雏鹅的致病性试验 10只，对照鹅5只，试验鹅每只肌注0．3ml病毒原液，隔离观察10d。 1．7．3对1日龄雏鸭的致病性试验 用237--F3病毒对1日龄北京鸭进行致病性试验，试验鸭与对照鸭各5只，试验鸭每只口服病毒原液0． 3ml，隔离观察10d。 1．7．4对30日龄乳鸽的致病性试验 染情况。 1．7．5对上述人工感染死亡的鸡、鹅、鸽进行病毒回收，并对康复鸽、鹅检测其HI抗体。 2结果 2．1病毒分离 将处理好的脑、肝病料乳剂分别接种非免疫鸡胚，在24-30h后全部死亡，表现胚体充血，脑部较明显，肝肿 大、出血。HA为2 正常。用死亡的鸡胚尿囊液感染CEF细胞，在接种后30h开始细胞出现拉网，形成空斑、细胞圆缩、脱落。收毒后 测HA达