J亚群禽白血病病毒超感染抗性鸡胚成纤维细胞系建立.pdfVIP

第六攻全国台员代表大会暨第11放学术研讨会 能促进了染毒的GEF细胞的凋亡． ． 发现GPVB株的细胞适应毒最早在感染细胞后48小时检出病毒抗原的存在17J。此结果表明单抗介导的IFA 法能更加灵敏、快速地反映出GPV在宿主细胞中的复制。 的动态复制增殖的检测研究． Kisary 连续传代后的细胞适应性的提高，病毒毒力又会逐渐减弱。本研究中．对3日龄雏鹅的攻毒感染实验的结 适应性与病毒毒力的致弱性密切相关。也即病毒在细胞的传代过程中，通过细胞和病毒的相互作用，病毒 的毒力因子逐渐受到细胞的修饰而逐渐改变，晟终降低甚至失去对动物体的致病能力。但由于目前国内外 尚未报导GPV的准确毒力因子的具体成分和定位，所以细胞传代对病毒毒力的修饰现象的具体机制还未 有深入研究。 时达到高峰，随后缓慢下降。但是，体外中和效价与体内的中和保护率的相关性还有待于下一步在动物体 内进行抗强毒感染保护实验。 of 对细胞培养法能否直接用于小鹅瘟的临床诊断，目前有二种不同观点。第一种是以经典的《Disease 断”HJ。第二种是殷震主编的《动物病毒学》所表述的“GPV需经细胞连续传代或其鹅胚适应株才能在GEF 内增殖”，这也意味着此法不能直接用于l临床诊断。本研究的结果表明，田间强毒株在GEF的培养需要很 长一段时间的盲传适应期，因此，细胞分离培养田间强毒的方法不适台于临床快速诊断。 参考文献略 J亚群禽自血病病毒超感染抗性鸡胚成纤维细胞系建立 叶建强，秦爱建，邵红霞，刘红梅，金文杰，刘岳龙 (扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室，江苏扬州225009) 摘要：将J亚群禽白血病病毒囊膜基因(ALV-J 果表明，通过Zeocin药物筛选获得了稳定表达ALV-J 良好的抗病毒作用。这一细胞系的构建为研究ALV-JEnv蛋白与宿主细胞表面受体相互作用分子机理提供 了很好的工具，对进一步探索聊v基因功能，疫苗的开发及转基因抗病鸡的构建等具有重要意义。 关键词J亚群禽自血病病毒；emJ基因；表达；细胞系；抗病毒感染 835 家禽传染病 其中erlv基因编码的囊膜蛋白是该类病毒的主要表面蛋白。该蛋白与靶细胞表面特异性受体相互识别、结 合是病毒进入靶细胞，进行复制繁殖所必需的IlI。当细胞表面特异性受体被病毒产生的Env蛋白封闭后， 相应病毒就不能再次感染此类细胞．表现出强力的超感染抗性121，且这种超感染抗性不依赖于完整的病毒 粒子，而仅依赖于囊膜糖蛋白及相应细胞受体问的识别与结合l”。ALV-J是～类能引起肉鸡骨髓细胞瘤 (ML)的新的禽白血病病毒。该病毒自分离以来9J，十几年来已蔓延到许多国家，我国也已分离到了多株 法和疫苗，本研究从超感染抗性出发，利用ALV-Jmv基因及ALv-J宿土细胞，以建立一个稳定表达ALV -Jertv基因的细胞系，为今后疫苗的开发及转基因抗病鸡的培育提供理论基础。 1材料和方法 1．1细胞、病毒、载体、引物与核酸探针 DFI细胞系为0系鸡胚成纤维细胞(美国禽病与肿瘤实验室赠)；生长液为含10％犊牛血清、青链霉 env基因，由作者自行制备。具体方法按Dig标记试剂盒(德国Borhringer公司)说明书进行。 1．2试剂 标记的羊抗鼠lgG抗体．均购自Sigma公司。 1．3重组质粒的构建及瞬时表达 通过BamHI和XhoI酶切，T4连接酶连接以及转化，将质粒4817TA一12中ALv-Je．ffv基因克隆进 达，具体方法步骡见参考文献pJ；一部分细胞用药物Zeocin进行抗药性细胞筛选。 1．4抗药性细胞系筛选及稳定表达鉴定 转染2天后的细胞用工作浓度的药物Zeocin进行筛选，每隔4天换液一次，三周后获得抗药性细胞； 抗药性细胞在含药物Zeoein的培养基中继续不断筛选。传30代后，冻存。13个月后复苏。复苏后继续在 步骤见参考文献…1。 1．5抗病毒试验 传代，继续维持培养7天后，取上清感染预先准备的96孔板中新鲜DFI细胞．每个上清感染8孔。培养 7天后