K562细胞转P16基因前后流变学特性的改变.pdfVIP

K562细胞转p16基因前后流变学特性的改变 姚伟娟 陈凯谢利德孙大公 文宗喂与 (北京大学医学部基础医学院物理教研室，北京，100083) 摘要:用FuGene6介导抑癌基因p16表达载体pBABE-puro-pl6转染p16阴性的人红白血 病细胞株K562，经药物筛选后。获得转基因K562(K562-p16)。采用微吸管技术并配合 某些生物物理技术，研究K562细胞在转基因前后生物流变特性的改变。结果表明，p16 基因的引入使K562细胞表面电荷密度增加，其电泳率从0.76士0.02pm/sV//cm增加到 0.92t0.071tm/s/V/cm(p0.05)，表明p16基因也许通过影响细胞周期而影响细胞表面电荷， 进而抑制肿瘤细胞与血管内皮细胞的粘附。K562-p16的抗渗透破碎能力变差，则说明外 源p16基因的引入使K562细胞向容易被破坏的方向转化。用标准固体粘弹性模型拟合微 吸管实验结果后，发现表征细胞最大变形能力的弹性系数K,增加 (从19.9112.8N/m2增加 为24.7110.9N/ml,p0.05)，而另一弹性系数KZ和粘性系数”无明显改变，说明p16使K562 细胞刚性增大，这一方面使细胞转移较为困难，另一方面又使它在血流中被破坏的几率增 大。这些结论从生物流变学角度上将加深对p16基因抑制肿瘤转移、以及基因治疗理论和 实验的认识。 VOW.K562细胞:016基因:微吸管;生物流变特性 1引言 到目前为止，人们对红细胞的生物力学特性已经了解和研究得非常透彻，对白细胞和 肿瘤细胞生物物理特性的研究也越来越多。这是因为，白细胞具有独特的形态和粘附特性， 这使得它在微循环中产生比红细胞大得多的阻力。在人体的病理部位，如低流速的毛细血 管网络中，白细胞的这一特性很容易被扩大111,0.Linderkamp等(z.31就发现患败血症的新 生儿的未成熟和活化中性粒细胞被动变形能力下降，这会损害微循环，增加他们器官受损 的危险。同样，中性粒细胞的变形性下降，会使新诊断出的但未加以控制的胰岛素依赖的 糖尿病儿童患急性心血管并发症的危险增加。可见白细胞或肿瘤细胞在血管灌注中具有非 常重要的作用。同时，白细胞或肿瘤细胞可以在某些部位受到因子的刺激而活化，跨过血 管内皮而进行转移4[1，执行特定的生理功能或生成新的肿瘤。因此，研究白细胞及肿瘤细 胞的生物流变特性对于解释与之相关的生理现象有重要意义。八十年代初，人们使用微吸 管 (micropipette)研究了白细胞的流变特性(51.提出了用标准固体粘弹性模型来描述白细 胞在发生小应变时的变形，从而为进一步研究健康人和病人的白细胞的流变特性提供了基 础。SungK-LP.等6()研究了细胞毒T淋巴细胞介导的杀伤过程中淋巴细胞与靶细胞粘弹性 的变化。龙勉等m发现肝实质癌细胞较胎肝细胞更容易变形，所以易发生转移。用具有诱 导分化作用的苦参碱作用人红白血病细胞K562后，K562的粘弹性发生变化(al 近年来，分子生物学用基因疗法治疗肿瘤取得了长足的进步，例如，在2000年，Delgado 等91〔iff究了某些基因对白血病细胞增殖的抑制作用。另外，我们已经知道p16基因是一种 重要的抑癌基因，它的缺失、突变可造成多种肿瘤的恶性增生。K562细胞就是p16阴性 的一种异常的分化不完全的血细胞，仅能提供胚胎期和胎儿期红系细胞环境Pal。许多学 者发现p16基因可以抑制K562细胞的增殖[11.12]，并认为p16也许是对病人进行基因治疗 的合适基因。所以研究p16引起的K562细胞生物学特性和生物流变学特性对于探讨基因 治疗是有益的，但是人们研究前者较多，而后一方面的工作还未见过报道。本文将使用微 吸管技术，并配合某些生物物理测量技术对K562细胞转p16前后的生物物理特性进行比 较，以探讨p16抑癌作用和肿瘤转移的机理。 基金项目:本课且受国家自然科学基金 (和博士点基金 号〔9729)资助 .贵任作者 15 s材料和方法 2.1转p16基因的K562细脑的制备131 方法简述如下:K562为本室冻存，p16表达载体pBABE-puro-pl6由美国NIlI提供， 全长6.1kb，带有原核筛选标记Amp和真核筛选标记Puro。用FuGene6介导p16表达载 体转染K562细胞，进行耐药株筛选，获得转基因K562(K562-pl6)。经过RT-PCR、流 式细胞计和细胞生